Левзеи экстракт жидкий инструкция по применению: (Leuzeae extract fluid), ,

Содержание

Левзея

Состав

В состав корней левзеи входят:

  • Дубильные вещества – помогают снять воспаление, остановить развитие инфекционных процессов.

  • Алкалоиды – тонизируют, помогают поднять работоспособность, снижают влияние стресса на организм.

  • Каротин – улучшает состояние сосудов, тканей, имеет антиоксидантный эффект, помогает бороться с накоплением свободных радикалов.

  • Инулин – природный пребиотик, стимулирующий пищеварение, способствующий усвоению полезных веществ из пищи, укрепляющий иммунную систему.

  • Витамин С – сильный антиоксидант, активно участвует в обменных процессах, помогает бороться с воспалительными явлениями. Улучшает состояние клеток, укрепляет стенки сосудов.

Также в состав входят эфирные масла, смолы, флавоноиды.

Свойства

Препараты на основе левзеи способствуют улучшению кровотока и питания головного мозга, поддержанию нормального давления, метаболизма, позволяют организму адаптироваться при резком изменении климата или характера нагрузок. Левзея помогает улучшить эректильную функцию, стабилизировать психологическое состояние при лечении алкогольной зависимости, табакокурения, нормализовать работу почек и печени. Применение экстрактов и настоев благоприятно сказывается на составе крови, служит профилактикой образования холестериновых отложений на стенках сосудов.

Основные эффекты левзеи:

  • Тонизирующее и стимулирующее действие на ЦНС. Левзея способствует снятию раздражительности, повышению внимательности, улучшению памяти.

  • Снижение утомляемости при физической и умственной работе. Вещества в составе растения помогают бороться с хронической усталостью, легче переносить монотонную нагрузку.

  • Адаптогенное действие. Препараты левзеи помогают реагировать на изменение внешних условий, легче с ними справляться, давать иммунный ответ.

  • Улучшение состава крови. При приеме растения снижается концентрация холестерина, нормализуется концентрация гемоглобина, эритроцитов, снижается риск развития анемий.

  • Повышение кровотока в мелких сосудах, что хорошо влияет на зрение, внутренние органы.

  • Снятие спазмов при мышечных, головных болях и болях в кишечнике.

Левзея повышает интенсивность секреции в половых железах, способствуя восстановлению нормальной потенции, регулирует давление при гипотензии.

Экстракт левзеи помогает накопить аденозинтрифосфорную кислоту и гликоген в печени, скелетных мышцах и сердце. Эти вещества необходимы для получения энергии во время высоких нагрузок. За счет улучшения обмена веществ ускоряется вывод молочной кислоты из мышц, что помогает спортсменам быстрее восстанавливаться после тренировок.

Таблетки и жидкие формы препаратов способствуют поддержанию в норме уровня глюкозы в крови во время выброса адреналина, а также препятствуют развитию гипогликемий при инсулинотерапии.

Формы выпуска и прием

На основе левзеи выпускаются бальзамы, настои, эликсиры, экстракты, таблетки и капсулы. Растение часто входит в состав общеукрепляющих средств, лечебных сиропов, стимулирующих препаратов, витаминов и добавок для мужчин.

  • Жидкие настои, эликсиры, бальзамы можно добавлять в чай. Они приятны на вкус, хорошо усваиваются, подходят для тех, кому сложно проглотить таблетку или капсулу. Можно принимать курсами или по мере необходимости.

  • Твердые формы содержат сбалансированный подбор веществ в точной дозировке. Рекомендуется курсовой прием по 30 дней с перерывом 60-90 дней.

Наиболее эффективно полезные соединения усваиваются при приеме добавок с левзеей во время еды или сразу после. Из-за возбуждающего и тонизирующего эффекта средства желательно употреблять в первой половине дня.

Противопоказания и побочные действия

Стойких противопоказаний добавки и препараты с левзеей не имеют. Прием не рекомендуется при:

Длительное употребление и превышение дозировок могут привести к нарушению работы сердца, повышению давления, расстройствам пищеварения.

Левзеи экстракт жидкий | Leuzeae extract fluid — описание препарата, ⚕️ инструкция по применению, противопоказания, отзывы | 🧾 Аналоги для Левзеи экстракт жидкий

Аналоги:

  • Биоарон
  • Вигор
  • Вивабон
  • Ван-Би
  • Авиценна
  • Кедровит
  • Трекрезан
  • Ладастен

Левзеи экстракт жидкий – описание

Показания к применению:

– В составе комбинированной терапии: астения, физическое и – умственное переутомление, снижение потенции, период реконвалесценции.

[ads-mob-1]

Способ применения и дозировки:

Принимают внутрь. Капли и экстракт для приема внутрь: по 20-30 кап. 2-3 раза/сут, во время еды. Сырье растительное (брикеты): 1 г сырья (2 брикета) заливают 200 мл воды, нагревают на кипящей водяной бане 15 мин, охлаждают при комнатной температуре 45 мин, процеживают, оставшееся сырье отжимают и доводят объем до 200 мл. Настой принимают по 100 мл до еды утром и днем. Курс лечения – 2-3 нед.

Противопоказания:

– Артериальная гипертензия
– Аритмии
– Острый период инфекционных заболеваний
– Повышенная нервная возбудимость
– Эпилепсия
– Нарушения сна, хронические заболевания печени и почек, хронический алкоголизм (для лекарственных форм, содержащих этанол)
– Беременность, период лактации, детский возраст (до 12 лет)
– Повышенная чувствительность к растительному средству.

[ads-mob-2]

Фармакологическое действие:

Средство растительного происхождения, оказывает адаптогенное и общетонизирующее действие. Способствует накоплению гликогена и АТФ в скелетных мышцах, печени и сердце, снижает концентрацию глюкозы при адреналиновой гипергликемии и препятствует развитию гипогликемии при введении инсулина. Обладает гиполипидемическим и антигипоксическим свойствами, повышает устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям внешней среды, к физическим нагрузкам. Повышает умственную работоспособность, снижает утомляемость, улучшает память, потенцию, повышает способность к концентрации внимания.

Побочные действия:

– Возможно: повышение АД, головная боль, раздражительность, бессонница, диспепсия
– Аллергические реакции.

Форма выпуска препарата:

Экстракт для приема внутрь (жидкий) 1 л

корневища с корнями левзеи сафлоровидной 1 кг.

Данная страница носит информационный характер! Описание препарата Левзеи экстракт жидкий не должно использоваться пациентами для принятия самостоятельного решения об их применении. Решение о назначении препарата и способе его применения принимается только лечащим врачом в результате очной консультации.


Поделиться ссылкой:

Полезно! Бесполезно

Навигация по записям

Левзея — описание ингредиента, инструкция по применению, показания и противопоказания

Описание левзеи

Левзея – растение семейства Астровые, произрастающее на Алтае. Ее высота может доходить до 2 м, но обычно не превышает 100 см. Стебли прямостоячие, не ветвистые. Цветы фиолетовые. Корневище имеет много отростков и разрастается в ширину. В качестве лечебного сырья используют корень.

Состав экстракта

Химический состав корневища левзеи представлен:

  • дубильными веществами, оказывающими противовоспалительное и антиинфекционное действие;
  • алкалоидами, проявляющими тонизирующую и антистрессовую активность;
  • каротином – природным антиоксидантом;
  • инулином – пребиотиком и стимулятором пищеварения;
  • витамином C – мощным антиоксидантом и участником обменных процессов;
  • флавоноидами – антиоксидантами;
  • эфирным маслом, обладающим антисклеротическим, обезболивающим и спазмолитическим действием.


Фармакологические свойства

Препараты левзеи улучшают кровообращение головного мозга, восстанавливают обменные процессы, оптимизируют кровяное давление и повышают адаптационные способности организма.

Улучшение кровотока благоприятно сказывается на зрении и функционировании внутренних органов. Лекарственное растение также улучшает эректильную функцию, работу печени и почек.

Поскольку левзея тонизирует и стимулирует центральную нервную систему, можно использовать ее для стабилизации психического состояния и предупреждения эмоциональных срывов в период избавления от табачной или алкогольной зависимости. Она снимает раздражительность, повышает память и внимательность.

Левзея благоприятно влияет на состав крови и предупреждает формирование атеросклеротических бляшек на сосудистых стенках. Активные компоненты растения повышают работоспособность, что позволяет легче переносить тяжелые физические и интеллектуальные нагрузки.

Растение оптимизирует состав крови. При его регулярном приеме в крови понижается уровень холестерина, оптимизируется концентрация эритроцитов и гемоглобина.

С помощью левзеи можно избавиться от кишечных, мышечных болей.

Экстракты левзеи стимулируют секрецию половых гормонов, что помогает восстановить потенцию и нормализовать давление при гипотензии. Они обеспечивают накопление в организме АТФ и гликогена, которые необходимы для высвобождения энергии во время интенсивных нагрузок. В результате улучшения метаболизма из мышечной массы быстрее выводится молочная кислота, что ускоряет восстановление после тренировки.

Внимание! Левзею используют для поддержания нормального уровню глюкозы при выбросе адреналина, что не дает развиться гипогликемии при инсулинотерапии.

Применение левзеи

Левзею можно приобрести в виде капсул, таблеток, бальзама, эликсира, настоя, экстракта. Ее включают в рецептуры лекарственных сиропов, общеукрепляющих и стимулирующих препаратов.

Настои, бальзамы и эликсиры можно пить как самостоятельное лекарство или добавляя в чай. Они имеют приятный вкус и хорошо усваиваются за счет жидкой формы. Твердые препараты левзеи принимают курсами: по 1 месяцу с перерывами в 1–1,5 месяца. Дозировка зависит от вида средства.

Чтобы активные компоненты левзеи лучше усвоились, стоит принимать ее в процессе или сразу после еды. Поскольку она возбуждает и тонизирует центральную нервную систему, не стоит осуществлять ее прием во второй половине дня.

Противопоказания 

Левзея противопоказана при непереносимости компонентов, бессоннице, гипертонии. Длительное применение препаратов и народных средств на ее основе может быть чревато нарушением работы сердца, расстройством пищеварения и повышением артериального давления.

Левзея фл.(р-р орал.) 50мл — инструкция по применению, описание, противопоказания, побочные действия, передозировка, состав

Описание состава и формы выпуска
Экстракт для приема внутрь (жидкий) 1 л
корневища с корнями левзеи сафлоровидной 1 кг

50 мл — флаконы темного стекла (1) — пачки картонные.

Описание фармакологического действия

Средство растительного происхождения, оказывает адаптогенное и общетонизирующее действие. Способствует накоплению гликогена и АТФ в скелетных мышцах, печени и сердце, снижает концентрацию глюкозы при адреналиновой гипергликемии и препятствует развитию гипогликемии при введении инсулина. Обладает гиполипидемическим и антигипоксическим свойствами, повышает устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям внешней среды, к физическим нагрузкам. Повышает умственную работоспособность, снижает утомляемость, улучшает память, потенцию, повышает способность к концентрации внимания.

Режим дозирования

Принимают внутрь. Капли и экстракт для приема внутрь: по 20-30 кап. 2-3 раза/сут, во время еды. Сырье растительное (брикеты): 1 г сырья (2 брикета) заливают 200 мл воды, нагревают на кипящей водяной бане 15 мин, охлаждают при комнатной температуре 45 мин, процеживают, оставшееся сырье отжимают и доводят объем до 200 мл. Настой принимают по 100 мл до еды утром и днем. Курс лечения — 2-3 нед.

Применение при беременности и кормлении грудью

Противопоказан при беременности и в период лактации.

Побочное действие

Возможно: повышение АД, головная боль, раздражительность, бессонница, диспепсия; аллергические реакции.

Показания к применению

В составе комбинированной терапии: астения, физическое и умственное переутомление, снижение потенции, период реконвалесценции.

Противопоказания к применению

Артериальная гипертензия, аритмии, острый период инфекционных заболеваний, повышенная нервная возбудимость, эпилепсия, нарушения сна, хронические заболевания печени и почек, хронический алкоголизм (для лекарственных форм, содержащих этанол), беременность, период лактации, детский возраст (до 12 лет), повышенная чувствительность к растительному средству.

Особые указания

Во избежание нарушения сна не следует применять во второй половине дня, позднее чем за 3-4 ч до сна.

Применение при нарушениях функции почек

Противопоказан при хронических заболеваниях почек.

Применение при нарушениях функции печени

Противопоказан при хронических заболеваниях печени.

Применение у детей

Противопоказан в детском возрасте до 12 лет.

дозировка, передозировка и возможные отрицательные последствия

38. Дозировка, Передозировка,
Возможные отрицательные последствия
Левзея — легенда древней восточной медицины, включен в фармакопею 15 государств
Широко и давно используется в Спорте, Медицине, Науке и Домашней Практике
А также в животноводстве и ветеринарии (птицы, свиньи, КРС, лошади и т.д.)
Не содержит токсичных веществ, совмещается с алкоголем и лекарствами

В официальной медицине применяется от сердечно-сосудистых и раковых болезней
Устраняет головные и сердечные боли, нормализует артериальное давление
Восстанавливает и защищает печень, почки, сердце, мозг и мышцы
Прием Заказов на Семена, Корни, Левзею-порошок, а также аналог-Серпуху



ДОЗИРОВКА ПРОДУКТА «ЛЕВЗЕЯ-ПОРОШОК» (из Leuzea, Rhaponticum)
Продукт из Левзеи сафлоровидной — Leuzea, Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin, maral root (рапонтик, рапонтикум, маралий корень) характеризуется значительной широтой оптимальных дозировок. Разовая доза, используемая в профилактических целях, равна 25 мг; лечебная доза – 25-50 мг; спортивная доза может достигать 100 мг и выше. Сравнительные величины доз приведены на рисунке (25 мг — величиной с горошину черного перца).

Левзея употребляется перорально – в виде сухого порошка “под язык” (сублингвально), или, заваривая кипятком, в качестве добавки к черному чаю, в виде фиточая совместно с другими лекарственными травами, а также в качестве спиртовых экстрактов и настоев (в соотношении 1:20…1:100 – масса/объем).

Исходя из необходимости, левзею можно принимать в любое время суток. Принимают поздно вечером, если предстоит работа в ночное время и нужно снять сонливость и усталость, сохранить высокую работоспособность. Если Вы чувствуете, что начинаете заболевать, принимайте чаще – через каждые 3-4 часа.

При вирусной и бактериальной интоксикации, алкогольном опьянении, в случае болезни разовую дозу левзеи-порошка (25 мг) целесообразно увеличить в 2-3 раза. Для спортсменов с высоким уровнем метаболических процессов дозы постепенно могут быть увеличены в 4-10 раз. При этом большие дозы должны сочетаться с адекватным увеличением физических нагрузок на организм. Длительность приема не ограничена – от 2-3 до 10 лет.

Как правило, единовременно используются 1-2 дозы – утром, днем и вечером. Длительность приема для достижения значимого эффекта составляет 7 (1-10 дней). Разовый курс приема, в зависимости от величины и частоты доз, может достигать 30-60 дней, после чего рекомендуется делать перерыв на 30 (10-60) дней. Эффект физиологического последействия на организм человека составляет 1.5-2.0 месяца.

ПЕРЕДОЗИРОВКА
Лекарственный и иммуно-стимулирующий эффект Левзеи сафлоровидной — Leuzea, Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin, maral root (рапонтик, рапонтикум, маралий корень) не увеличивается пропорционально повышению дозы. Кратковременная или разовая передозировка без необходимости не приносит вреда, но и не помогает.

Диапазон кратности доз, при которых стимулирующий эффект малых доз меняется на противоположный тормозящий, достигает 200 раз. Высшая разовая доза равна 5-7 г.

Отрицательный эффект передозировки препарата из надземных частей (листьев левзеи) у подопытных крыс наступает при приеме 20 % от массы тела, при этом наблюдаются кратковременные расстройства органов чувств.

ВОЗМОЖНЫЕ ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ
При длительном приеме высоких доз Левзеи (главным образом корней и корневищ, которые могут содержат полиацетиленовые фототоксичные соединения и плесневые грибки) редко, но могут наблюдаться побочные явления в виде индивидуальной непереносимости – тошнота, диарея, рвота, ощущение сухости во рту.

Примечание. Информацию по побочным химическим веществам, содержащихся в корнях и корневищах левзеи сафлоровидной — Leuzea, Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin, maral root (рапонтик, рапонтикум, маралий корень) Вы можете найти по списку, изложенному на странице сайта: «Электронные библиотеки «

Симптомами передозировки (обычно это спиртовые экстракты из сомнительных источников, загрязненность которых визуально не обнаруживается) являются: повышенная раздражительность, нарушения сна, учащенное сердцебиение, психическая депрессия. При побочных отрицательных действиях показано немедленное промывание желудка, затем – симптоматическое лечение. Тяжелые отравления, аналогичные при приеме других адаптогенов (жень-шень, родиола розовая и т.д.) в литературе не описаны.

Следует подходить осторожно (под наблюдением врача) к применению левзеи сафлоровидной при лечении больных с тяжелыми хроническими заболеваниями сердечно-сосудистой системы (артериальная гипертония тяжелой формы, аритмия), острыми инфекционными заболеваниями, хроническими заболеваниями почек, печени в фазе декомпенсации, психических заболеваний органического генеза, психозов.

Подбор дозы рекомендуется проводить индивидуально, ежедневно прибавляя или убавляя дозу препарата на 10-20 %, постоянно контролируя самочувствие, советуясь с лечащим врачом.

Особенности и различия препаратов из Левзеи, Технология Производства и их Активность описаны на страницах нашего сайта «Экдистен, Левзея и Маралий корень: Заказы, Технология, Дозировка и Активность — Ecdystenum, Rhaponticum-Leuzea and Maral root: Orders, Technology, Dosage, Activity»:

Дополнительная информация по другим Инструкциям (по Серпухе, использованию Левзеи в животноводстве) будет приведена в ближайшее время – следите в разделе «Новости»

ВЫСЫЛАЮТСЯ — Семена и Левзея-порошок для Спорта, Медицины и Домашней Практики

ЗАЯВКИ — Подавать по Электронной Форме: https://leuzea. ru/forms/leuzea_order.htm
Ваши письма по адресу: https://levzea.com

Левзея сафлоровидная: полезные свойства и противопоказания

© Ruvo233 — depositphotos.com

Левзея – природный растительный анаболик, содержащий экдизоны. Препараты на основе левзеи успешно заменяет аналогичные препараты синтетического происхождения, поэтому активно используется в спорте и медицине для строительства белковых молекул. Экдизоны – соединения, напоминающее по своему строению и функциям стероиды или фитогормоны. Вещества получают из надземных и подземных частей растения. Экдизоны входят в число основных компонентов многих препаратов для спортивного питания.

Общая информация

Левзея (большеголовник, рапонтикум, стемаканта, маралий корень) красивое многолетнее растение семейства астровых с необычными цветками куполовидной формы и ребристыми стеблями. Напоминает чертополох, но в отличие от него лишена колючек. Этот долгожитель среди трав способен жить сто лет. У нее мощный корень и крупные нижние листья, накапливающие гормональную составляющую. В высоту цветок вырастает до двух метров. Соцветие – фиолетовая или лиловая трубчатая корзинка.

Ничем особенным от своих «родственников» не отличается, но привлекает животных как лечебное средство. В Сибири ей лечатся олени, поэтому там ее называют маральим корнем и считают, что она может чудодейственным образом излечить от 14 болезней, поскольку проявляет тонизирующие и общеукрепляющие свойства. Растет левзея и в горах Алтая, Средней Азии.

Собирают ее в возрасте трех-четырех лет. Это пик концентрации полезных компонентов. Хранятся корневища не более двух лет.

Ученые Томского университета провели не одно клиническое испытание фармакологических и фармакогностических свойств растения, на основании которых с 1961 года препараты левзеи входят в Государственную Фармакопею России.

© Nikolay_Donetsk — depositphotos.com. Корень левзеи

Свойства

Левзея сафлоровидная имеет уникальный состав: множество эфиров, смол, дубильные вещества, алкалоиды витамина C, A, антрахионы (перистальтические детоксиканты), природный психостимулятор инокостерон, инулин, кумарины, антоцианы, флавоноиды, лимонная, янтарная, щавелевая кислота, камедь, катехины, ретинол, минералы, фосфор, кальций, мышьяк.

Такой набор биологически активных веществ наделяет растение мощным действием на организм человека. Однако основа этого влияния – инокостерон и эдистерон.

Благодаря им большеголовник:

  • Оказывает общеукрепляющее действие, повышает выносливость.
  • Противостоит кахексии разного генеза.
  • Тонизирует организм.
  • Улучшает потенцию.
  • Стимулирует либидо.
  • Активирует иммунитет на разных уровнях.
  • Понижает сахар крови.
  • Расширяет сосуды, нормализует АД.
  • Ускоряет кровоток.
  • Благотворно влияет на нервную систему, снимает раздражительность, усталость, утомляемость.
  • Способствует регенерации кожи и стимулирует остеосинтез.
  • Восстанавливает нормальные параметры крови.
  • Блокирует рост опухолей.
  • Лечит алкоголизм.

По сути, левзея – настоящий природный адаптоген.

Использование в разных отраслях

Растение востребовано в медицине, косметологии и дерматологии, используется в ароматерапии и бодибилдинге.

Дерматокосметология

В косметологии обратили внимание на способность экстракта рапонтикума активировать электролитный и кислородный обмен клеток дермы. Поэтому экстракт выступает составляющим элементом многих кремов, лосьонов, сывороток, тоников. Проявляется его действие омоложением кожи, регенерацией, разглаживанием морщин.

Каждый практикующий дерматолог или косметолог имеют в своем багаже собственный рецепт омолаживающей композиции, которая включает в разных пропорциях и комбинациях: спиртовой экстракт левзеи, чистотела, таволги, плаценты; эфиры жасмина, иланг-иланга, гвоздики, нероли, розы, пачули – коло 0,7% к общему объему. Такой раствор отбеливает, омолаживает, увлажняет.

Дерматологи борются с помощью эфирных масел растения с невротическим дерматитом, добавляя их в тонизирующие сыворотки и гели. Обычный отвар из маральего корня выполняет роль тоника в ежедневном уходе. Если его заморозить и использовать по утрам, эффект будет выраженным и длительным. Отвары левзеи используются и для лечения волос. Растение стимулирует рост стержней, укрепляет луковицы, предупреждает облысение. Нужно всего лишь ополаскивать волосы после каждого мытья.

Особенной эффективностью отличается маска для волос. Ее несложно приготовить самостоятельно: большую ложку оливкового масла, желток и несколько капель масла рапонтикума смешивают и наносят по всей длине волос на 20 минут перед мытьем головы.

© Nikolay_Donetsk — depositphotos.com

Ароматерапия

Ароматерапевты советуют добавлять эфир растения в аромалампы и медальоны. Кроме того, он отлично подходит для локального массажа: способствует концентрации, снимает раздражительность, переутомление, нормализует сон, активирует память, восстанавливает зрение – выполняет все функции адаптогена.

Применяют эфир большеголовника и при похмелье, мигрени, длительной работе за компьютером, курении кальяна, аромаванночек и ингаляций.

Пищевая промышленность

Левзея в составе тонизирующих российских напитков стала достойным ответом западным аналогам. Байкал, Саяны, Тархун – напитки из Черноголовки, которые сегодня успешно завоевывают внутренний рынок, восстанавливая былую славу и вытесняя Кока-колу, Пепси и прочий импорт. Кроме того, рапонтикум добавляют в джемы, мед, выпечку, хлеб.

Медицина

Ходят легенды о том, как чудодейственно быстро левзея восстанавливает силы, насыщает организм энергией. Мы упомянули 14 болезней которые лечит маралий корень. Вот они:

  • Неврастения, расстройства ЦНС любого генеза.
  • Синдром хронической усталости, депрессия.
  • Бессонница.
  • Мигрень.
  • Отсутствие аппетита.
  • Импотенция, эректильная дисфункция.
  • Вегетососудистая дистония, гипотония и постоянное чувство слабости.
  • Алкоголизм.
  • Стеноз периферических сосудов, замедление кровотока.
  • Низкая работоспособность.
  • Трофические язвы.
  • Воспалительные заболевания женской половой сферы, ПМС, вторичное бесплодие.
  • Болезни системы кроветворения.
  • Варикоз.

Основа терапии – его энергетическое действие. Растение буквально реанимирует пораженные клетки, возвращая им жизненные силы. Поэтому при лечении прежде всего используют именно стимулирующие способности растения, его адаптогенные и психотропные свойства. Это они воздействуют на патологии, спровоцированные нарушениями в работе ЦНС и сердечно-сосудистой системы.

© cheri131 — depositphotos.com

Большеголовник в спорте

Природный адаптоген имеет определенные показания к применению при спортивных тренировках:

  • Наращивание мускулатуры.
  • Коррекция метаболизма сердечной мышцы.
  • Профилактика и лечение перетренированности.
  • Восстановление гепатоцитов в комплексе с гепатопротекторами.
  • Купирование анемии в сочетании с препаратами железа.
  • Повышение потенции.
  • Период акклиматизации.
  • Реконвалесценция – ускоряет время выздоровления.

Левзея стимулирует выносливость спортсменов и повышает их адаптационные возможности при перегрузках. Это дает гарантию достижения высоких результатов в спорте. Прилив сил и энергии – мотивация к увеличению тренировочных нагрузок.

Помимо этого, большеголовник ускоряет реабилитацию после тренировок, благодаря стимуляции окислительно-восстановительных процессов, выведению токсинов молочной и пировиноградной кислоты – основной причины усталости после тренировки.

Препараты растения аккумулируют гликоген в печени и миокарде, который выступает основным топливом для мускулов. Только после его полного расходования в игру вступают аминокислоты и жирные кислоты, способствующие росту мышц. У левзеи есть еще одно свойство, делающее ее незаменимой во время тренировки. В терапевтических дозах она совершенно безопасна ввиду своего природного происхождения.

Принимают маралий корень в виде спиртовой настойки в пропорции 1:10, по большой ложке, трижды в день перед приемом пищи. Или в таблетках, с добавлением аскорбинки. Максимальная длительность курса – 3 месяца.

Препараты:

  • Левзея П – таблетки, стимулирующие работу пищеварительной, эндокринной, сердечно-сосудистой, нервной и иммунной систем. Это в свою очередь приводит к активации процессов саморегуляции и восстановлению необходимого баланса жизненно важных функций организма. Корректирует дезадаптацию. Попутно улучшает мозговую деятельность, концентрацию внимания и насыщает ткани микроэлементами и витаминами. Есть и противопоказания: индивидуальная непереносимость, инфекции, ХБП.
  • Экдистен – оказывает тонизирующее действие, способствует синтезу белковых молекул, то есть наращиванию мышечной массы. Выпускается в таблетках, устраняет астению и астенодепрессию. В отличие от синтетических стероидов не влияет на кору надпочечников. Противопоказан при гипертонии и гиперкинезии.

Силовые тренировки

Маралий корень – природный анаболиком с эффектом фитостероидов благодаря содержанию экдизонов в составе. Свойства этих соединений и используются в силовых тренировках. Растительные гормоны в разы усиливают белковый синтез, наращивая мускулы, укрепляя миокард, печень, почки. В свою очередь, это приводит к росту выносливости спортсмена. Кроме этого, большеголовник расширяет просвет сосудов, что улучшает кровоток, стимулирует образование капилляров и новых коллатералей.

В итоге облегчается работа сердца и сосудов, частота сердечных сокращений снижается, что дает возможность наращивать физические нагрузки. Левзея выводит метаболиты после тренировок, уменьшает время реабилитации, провоцирует умеренную выработку тестостерона. Используется в виде настоек, порошка, таблеток: Экдистен, Ратибол, экстракт маральего корня, левзея-порошок. Разница в препаратах представлена в таблице.

Наименование Состав, свойства, особенности
Левзея-порошок Инновация на основе молодых побегов адаптогена рапонтикума: растет на субальпийских лугах, высоко в горах (до 3000 метров над уровнем моря). Собирают растение весной в фазу своей максимальной фитоактивности. В 1 кг до 20 000 эффектодоз, до 50 000 – профилактических, до 5 000 – спортивных. Комплекс трав и корней содержит около 70 экдистостероидов, в том числе – 0,5% экдистерона, до 20 витаминов, 45 минералов, более 30% белка и до 20% незаменимых аминокислот.
Маралий корень Вытяжка из надземных частей большеголовника сафлоровидного. Название «маралий корень» основано на легенде, согласно которой именно этим растением лечатся олени-маралы. Для человека корень не съедобен и не переваривается в кишечнике. Да и сама заготовка корней проблематична, поскольку при выкапывании уничтожаются «детки» – боковые побеги. Собирают сырье осенью. И это его основное отличие от других препаратов. БАДы на такой основе самые эффективные по определению, именно они и продаются в наших аптеках.
Экдистен или экдистерон. Аналоги: Леветон, Адаптон, Русс-Олимпик, Biostimul, Triboxin Это переработанный корень растения. В России добились его 96% очистки, В США допускается не более 80%. Благодаря переработке, порошок из корня отлично усваивается. Препарат включает гидроксиэкдизон-20, инокостетерон, экдизон, Mg, Zn, B6. Отличается источником анаболика и составом. Эффективность умеренная, поскольку в корнях экдистерона меньше, чем в листьях в 20 раз.
Настойка левзеи Настойку готовят из корней, поскольку только они подходят для настаивания на спирте. Все полезные вещества сохраняются в неизменном виде. Они не растворяются в воде, поэтому минуют ротовую полость и желудок активными. Действующие соединения всасываются в кишечнике.

Есть общее замечание: препараты листьев практически безотходны и безвредны. БАДы из корней всегда обрабатываются антибиотиками, чтобы предупредить риск загнивания при хранении, поэтому применять их нужно с осторожностью.

Женский спорт

Большеголовник используется в косметике, чем привлекает женщин. Но и в женском спорте левзея приносит много пользы:

  • Устраняет болезненность ПМС, облегчает течение месячных.
  • Купирует воспалительные процессы в мочеполовой сфере.
  • Нормализует цикл.
  • Стимулирует рост мышечной массы, исключая тестостероновую зависимость, что чрезвычайно важно для женщин.
  • Стимулирует либидо.
  • Снимает повышенную раздражительность.
  • Улучшает показатели крови.
  • Повышает выносливость.
  • Нормализует сон.
  • Укорачивает период восстановления после соревнований и тренировок с высокой физической нагрузкой.

Рекомендации по дозировке порошка левзеи для женщин:

Поскольку порошок – это мерное вещество, следует придерживаться некоторых правил при его употреблении:

  • Всегда при необходимости делить пакетик ориентируйтесь на рисунок в инструкции. Спортивная доза назначается тренером индивидуально от 100 мг и примерно равняется фасолине. В силовых видах спорта доза может достигать 500 мг – это треть чайной ложки.
  • Маралий корень нельзя принимать на ночь: это природный стимулятор активности, а значит, сна не будет минимум часа 4. При передозировке и все 12.
  • Прием порошка сублингвальный (под язык), с небольшой дозы от 100 мг, которая рассасывается за несколько минут.

© lubov62 — depositphotos.com. Стебли левзеи

Противопоказания к приему левзеи

Их немного, но они есть:

  • Нарушения в процессах торможения и возбуждения в ЦНС.
  • Беременность и лактация.
  • Возраст до 18 лет.
  • Эпилепсия.
  • Шизофрения.
  • Бессонница.
  • Язвенная болезни желудка.
  • Сахарный диабет.
  • Высокое артериальное давление.

Применение

Природный адаптоген рекомендуют принимать даже при обычной хронической усталости, чтобы ускорить процесс восстановления. Правила употребления разных лекарственных форм представлены в таблице.

Форма Способ употребления
Настойка Измельчить корень, залить стаканом спирта и в темном месте выдержать три недели. Процедить и принимать по столовой ложке три раза в день до еды. Последний прием за 4 часа до сна. Суть – стимулирование иммунитета в межсезонье и эпидемии.
Настой Листья растения заливают стаканом крутого кипятка и настаивают час. Пьют как в первом случае, чаще всего принимают при похмелье и алкогольной интоксикации.
Отвар Отваривают корень большеголовника в течение 20 минут и настаивают полчаса. Пьют трижды в день. Эффект самый мягкий, помогает при сверхурочной работе, в сессию.
Аптечный жидкий экстракт Тонизирует умственную деятельность.
Таблетки Источник витаминов. Принимают с 12 лет, круглогодично. Курс – 30 дней.
Масло Улучшает зрение, снимает интоксикацию, успокаивает нервы, нормализует АД, улучшает сон, поднимает настроение, снимает усталость. Капают в любую жидкость, на кусочек хлеба, сахар в дозировке по Инструкции.
Порошок Используют для реабилитации после травм и ран. Принимают сублингвально или растворяя в чае по 0,5 г (для профилактики – 0,25 г).
Мед Имеет особенный вкус, целебные свойства: тонизирует, снимает перенапряжение, стимулирует аппетит, улучшает работу сердца и сосудов.

Побочные эффекты

Практически отсутствуют. Имеет значение индивидуальная непереносимость.

Оцените материал

Эксперт проекта. Стаж тренировок — 12 лет. Хорошая теоретическая база по процессу тренировок и правильному питанию, которую с удовольствием применяю на практике. Нужна рекомендация? Это ко мне 🙂

Редакция cross.expert

экстракт левзеи жидкий — инструкция по применению, показания

Экстракт левзеи жидкий — растительный препарат с тонизирующим действием.

Форма выпуска и состав

Экстракт левзеи жидкий выпускается в виде экстракта для приема внутрь: жидкость красновато-коричневого цвета, в которой возможно выпадение осадка при хранении (25, 30, 40, 50 мл в флаконах (флаконах) из темного стекла, 1 флакон в пачке картонной).

В состав 1 литра экстракта входят:

  • Действующее вещество: корневища с корнями левзеи сафлоровидной — 1 кг;
  • Вспомогательный компонент: спирт этиловый (этанол) 70% — достаточно для получения 1 литра экстракта.

Показания к применению

Жидкий экстракт левзеи назначают в составе комплексного лечения астении, при умственном и физическом переутомлении, снижении потенции, а также в период выздоровления.

Противопоказания

  • аритмии;
  • Артериальная гипертензия;
  • Повышенная нервная возбудимость;
  • Острый период инфекционных болезней;
  • Нарушения сна;
  • Эпилепсия;
  • Хронический алкоголизм;
  • Хроническая болезнь печени и почек;
  • Период беременности и кормления грудью;
  • Возраст до 12 лет;
  • Повышенная чувствительность к биологически активным веществам растения.

Способ применения и дозы

Экстракт левзеи жидкий, принимаемый внутрь во время еды.

Разовая доза — 20-30 капель, кратность приема — 2-3 раза в сутки. Продолжительность лечебного курса 2-3 недели.

Целесообразность повторных курсов определяется врачом индивидуально.

Побочные эффекты

Во время терапии возможно развитие следующих побочных эффектов: диспепсия, повышенное артериальное давление, раздражительность, головная боль, бессонница, аллергические реакции.

специальные инструкции

Во избежание нарушения сна жидкий экстракт Левзея не рекомендуется принимать во второй половине дня (позднее, чем за 3-4 часа до сна).

Лекарственное взаимодействие

Экстракт левзеи жидкий является физиологическим антагонистом депрессантов центральной нервной системы (включая барбитураты, седативные средства, транквилизаторы, нейролептики и др.).

При применении препарата возможно усиление действия аналептиков и стимуляторов центральной нервной системы (камфора, кофеин, фенамин и др. )).

Условия хранения

Хранить в темном, сухом, недоступном для детей месте при температуре 15-25 ° С.

Срок годности — 3 года.

Эффекты rhaponticum carthamoides по сравнению с экстрактами glycyrrhiza glabra и punica granatum на признаки метаболического синдрома у крыс

BMC Complement Altern Med. 2014; 14: 33.

, 1, 2 , 1 , 2 , 1 , 3 , 2 , 2 и 1

Михаил Душкин

1 Лаборатория молекулярных и клеточных механизмов лечебных заболеваний Института внутренних болезней СО РАМН, Новосибирск, Россия

2 Институт физиологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук , Новосибирск, Россия

Марина Храпова

1 Лаборатория молекулярных и клеточных механизмов лечебных заболеваний Института внутренних болезней СО РАМН, Новосибирск, Россия

Геннадий Ковшик

2 Институт физиологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Новосибирск, Россия a

Марина Часовских

1 Лаборатория молекулярных и клеточных механизмов лечебных болезней Института внутренних болезней СО РАМН, Новосибирск, Россия

Елена Меньщикова

3 Центр клинической медицины и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Новосибирск, Россия

Валерий Труфакин

2 Институт физиологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Новосибирск, Россия

Анна Шурлыгина

2 Институт физиологии и фундаментальной медицины СО РАМН, Новосибирск, Россия

Евгений Верещагин

1 Лаборатория молекулярных и клеточных механизмов лечебных заболеваний Института внутренних болезней, Сибирь Филиал Ру АМН, Новосибирск, Россия

1 Лаборатория молекулярных и клеточных механизмов лечебных заболеваний, Институт внутренних болезней СО РАМН, Новосибирск, Россия

2 Институт физиологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Новосибирск, Россия

3 Центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Новосибирск, Россия

Автор, ответственный за переписку.

Поступило 7 июня 2013 г .; Принята к печати 15 ноября 2013 г.

Copyright © 2014 Душкин и др .; лицензиат BioMed Central Ltd. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальная работа процитирована должным образом. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Предпосылки

Rhaponticum cathamoides (RC) — эндемичное дикое сибирское растение с выраженными лечебными свойствами, которые до сих пор мало изучены.Целью этого исследования является изучение терапевтического потенциала экстракта RC (ERC) по сравнению с эффектами экстрактов Glycyrrhiza glabra (EGG) и Punica granatum (EPG) на модели крыс с диетой с высоким содержанием жиров (HFD). ) -индуцированные признаки метаболического синдрома; Таким образом, данное исследование направлено на решение серьезной глобальной проблемы общественного здравоохранения.

Методы

Шестимесячных самцов крыс Wistar Albino Glaxo в течение восьми недель придерживались стандартной диеты (SD), HFD или HFD, в которую были включены порошки ERC, EGG или EPG в дозе 300 мг / кг / день. .Определяли липидный профиль сыворотки, концентрации кортикостерона и цитокинов, толерантность к глюкозе, систолическое артериальное давление, накопление триацилглицерина и активность связывания ДНК PPARα в образцах печени.

Результаты

В отличие от EGG и EPG, добавка ERC значительно снизила вес эпидидимальной ткани (19,0%, p <0,01) и базальный уровень глюкозы в сыворотке (19,4%, p <0,05). ERC улучшил непереносимость глюкозы, а также дислипидемию более эффективно, чем EGG и EPG.Добавки EGG, но не ERC или EPG, снижали систолическое артериальное давление на 12,0% (p <0,05). Все протестированные экстракты снижали уровни IL6 и кортикостерона в сыворотке, вызванные HFD. Однако снижающие эффекты потребления ERC на уровень TNF-α в сыворотке и его восстанавливающее действие на уровень кортикостерона надпочечников значительно превосходили улучшения, вызванные EGG и EPG. Прием ERC также снижает накопление триацилглицерина и увеличивает ДНК-связывающую активность PPARα в печени в большей степени, чем EGG и EPG.

Выводы

Добавка порошка ERC улучшила метаболизм глюкозы и липидов более значительно, чем EGG и EPG у крыс, получавших HFD, поддерживая стратегию использования R. carthamoides для безопасного купирования метаболического синдрома и связанных с ним нарушений, таких как воспаление, стресс и стеатоз печени.

Ключевые слова: Rhaponticum carthamoides , метаболический синдром, кортикостерон, воспалительные цитокины

Общие сведения

Метаболический синдром, состояние, определяемое группой кардиометаболических факторов риска, включая висцеральное ожирение, сахарный диабет, сахарный диабет, дисбаланс значительная глобальная проблема общественного здравоохранения [1].Среди факторов окружающей среды основными причинами нарушения толерантности к глюкозе и дислипидемии, связанных с ожирением, являются диета с высоким содержанием жиров и малоподвижный образ жизни, распространенные в западном мире [2]. Метаболический синдром также часто характеризуется хроническим воспалением и стеатозом печени [3]. Раннее лечение людей с метаболическим синдромом может предотвратить развитие сердечно-сосудистых заболеваний. Современные стратегии лечения включают изменение образа жизни с помощью фармакологических вмешательств, направленных на комплексные проявления метаболического синдрома, по мере необходимости [4].Множественные биологические мишени, контролирующие эти проявления, потребуют одновременного применения различных классов лекарств, таких как статины, тиазолидиндионы, фибраты, бигуаниды, сульфонилмочевины, гипотензивные препараты и многие другие для достижения положительного эффекта. Хотя в разработке терапевтических стратегий для снижения факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний был достигнут значительный прогресс [5-7], комплексное лечение метаболического синдрома на практике часто является недостижимой целью.Проблема комплексного лечения метаболического синдрома возникает из-за длительного приема дорогостоящих лекарств, иногда приводящих к нежелательным побочным эффектам. Недавно был предложен ряд инновационных стратегий питания, основанных на длительной и успешной практике, в качестве безопасных альтернативных методов лечения для снижения заболеваемости, а также стоимости лечения метаболического синдрома [8-10].

На сегодняшний день зарегистрировано более 1000 лекарственных препаратов для лечения метаболических нарушений, хотя лишь небольшое количество из них получило научную и медицинскую оценку для оценки их сравнительной эффективности [11].Следовательно, необходимы дополнительные скрининговые испытания коммерческих растительных продуктов для разработки функциональных, а также аналитических основ стандартизации пищевых добавок [12]. Среди трав этого вида пищевые ингредиенты Glycyrrhiza glabra и Punica granatum широко используются в традиционной индийской и китайской медицине. Противодиабетические эффекты и эффекты против ожирения G. glabra [13,14] и P. granatum [15,16] относительно хорошо изучены на животных моделях. В частности, недавно было показано, что флавоноиды солодки подавляют накопление абдоминального жира и повышение уровня глюкозы в крови у крыс с ожирением [17] и мышей [18]. Высокое общее содержание полифенолов связано с антидиабетическим и антиоксидантным действием экстракта Punica granatum , наблюдаемым у мышей [19] и крыс [20].

Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin, широко известный как корень марала или русская левзея, широко используется в традиционной сибирской медицине, в основном для лечения перенапряжения и общей слабости после болезней, как стимулятор и средство от мужского пола. дисфункция.Основными биологически активными составляющими этого растения являются экдистероиды, флавоноиды и фенольные кислоты. Практически безопасные экстракты и препараты из этого растения обладают различными дополнительными антиоксидантными, иммуномодулирующими, противоопухолевыми и антимикробными эффектами [21]. Однако имеется относительно немного литературы о лечебных свойствах R. carthamoides для лечения метаболических нарушений. Кроме того, еще предстоит выяснить влияние R. carthamoides, , особенно на развитие метаболического синдрома, вызванного диетой с высоким содержанием жиров.Возможности R. carthamoides в подавлении основных проявлений метаболического синдрома изучены недостаточно. В настоящем исследовании мы проверили влияние этанольного экстракта корня R. carthamoides по сравнению с коммерчески доступными спиртовыми экстрактами корня G. glabra и кожуры P. granatum с заявленными противодиабетическими свойствами и свойствами против ожирения. признаки метаболического синдрома на модели крыс с ожирением.

Методы

Растительные материалы и химикаты

Порошок промышленного этанольного экстракта из корня R.carthamoides (дикорастущие) (содержание 20-гидроксиэкдизона 2,2% стандартизировано с помощью анализа ВЭЖХ), порошок экстракта корня солодки (глицирризиновая кислота (15,0%) кондиционирован анализом ВЭЖХ) и порошок экстракта кожуры граната (эллаговая кислота (40,0%) ) были кондиционированы с помощью анализа ВЭЖХ) были получены от KIT Co. , Ltd. (Алтайский государственный технический университет, Барнаул, Россия), Wixi Cima Science Co., Ltd. (Цзянсу, Китай (материк)) и Xian Yuensun Biological Technology Co. ., Ltd. (Шэньси, Китай (материк)), соответственно, и хранили при + 4 ° C до использования.Все остальные химические вещества были аналитической чистоты.

Животные, диеты и план эксперимента

Самцы крыс Wistar Albino Glaxo в возрасте шести месяцев были получены из Центра животных Института цитологии и генетики (Новосибирск, Россия) и содержались индивидуально в клетках в кондиционируемом помещении. комната (24,2 ° C) с 12-часовым циклом свет / темнота, пища и вода обеспечиваются ad libitum . Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами этики животных Директивы Совета Европейских сообществ (86/609 / EEC) и одобрены Комитетом по уходу за животными Института внутренней медицины, Новосибирск, Россия.Животные были случайным образом разделены на 5 групп по 10 крыс в каждой. Группа I содержалась на стандартной диете из брикетов (группа SD), содержащая 10% калорий, полученных из жира, в то время как группа II получала диету с высоким содержанием жиров (группа HFD), содержащую 60% калорий, полученных из жира (Лабораторснаб, Москва, Россия) для 8 недель. Крысам групп III, IV и V давали HFD с добавлением порошковых экстрактов R. carthamoides (группа ERC), G. glabra (группа EGG) и P. granatum (группа EPG). соответственно в суточной дозе 300 мг / кг массы тела (б.ш.) в течение 8 недель. Животных взвешивали один раз в неделю и ежедневно измеряли потребление пищи. В конце каждого экспериментального периода крыс лишали пищи на 16 ч, затем анестезировали внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала натрия (50 мг / кг м.т.) и умерщвляли. Эпидидимальную жировую ткань, надпочечник и печень извлекали и взвешивали.

Тест на толерантность к глюкозе внутрибрюшинно

На 8-й неделе эксперимента крыс лишали пищи на ночь (16 ч) и после сбора пробы крови натощак из хвостовой вены внутрибрюшинно вводили D-глюкозу (50% исходный раствор в физиологическом растворе). , 5 г / кг б.ш.). Концентрацию глюкозы в крови измеряли через 60, 120 и 180 минут после инъекции глюкометром One Touch Horizon (Lifescan, Johnson and Johnson, NJ, США).

Артериальное давление

На исходном уровне и в дальнейшем еженедельно систолическое и диастолическое артериальное давление измеряли с помощью устройства для неинвазивного измерения давления с использованием записи объемного давления CODA 2 (Kent Scientific, Торрингтон, Коннектикут, США) на не анестезированных крысах, удерживаемых в термопластиковая камера.

Определение содержания триацилглицерина, холестерина, свободных жирных кислот, кортикостерона и цитокинов в сыворотке крови

Образцы крови собирали в пробирки и центрифугировали при 2400 g.Концентрацию триацилглицерина (TG), общего холестерина (TC) и холестерина высокой плотности (HDL-C) в сыворотке крови измеряли ферментативным колориметрическим методом с использованием коммерческих наборов для анализа ферментов (Olvex Diagnosticum, Санкт-Петербург, Россия). Содержание холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) рассчитывали по формуле: Х-ЛПНП = ОС — (Х-ЛПВП + ТГ / 2,2). Концентрацию свободной жирной кислоты (FFA) в сыворотке крови измеряли с помощью ферментативного колориметрического анализа в соответствии с протоколом производителя (свободная жирная кислота, полумикро-тест; Roche Diagnostics, Penzberg, Германия).Гомогенат кортикостерона в сыворотке и надпочечниках анализировали с помощью иммуноферментного анализа. Пределы чувствительности составляли 30 пг / мл, а коэффициенты вариации составляли 7-9% с использованием набора для иммуноферментного анализа (EIA) (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA). Уровни фактора некроза опухоли-α (TNF-α) и интерлейкина-6 (IL-6) измеряли с помощью коммерчески доступных наборов ELISA для крыс (eBioscience, Калифорния, США).

Определение содержания триацилглицерина в печени

Примерно 0,2 г ткани печени гомогенизировали в 0.15 М раствором NaCl и экстрагируют смесью гексан: изопропанол (3: 2, об. / Об.), Содержащей 0,005% (мас. / Об.) Бутилированного гидрокситолуола, по методу Хара и Радина [22]. После 10 мин центрифугирования при 3000 g и 10 ° C верхнюю органическую фазу собирали и упаривали в жидком азоте. Общие сухие липиды ресуспендировали в 10% Triton X-100 и изопропаноле, и содержание ТГ определяли с помощью коммерческого набора для анализа ферментов (Olvex Diagnosticum, Санкт-Петербург, Россия) на автоматическом биохимическом анализаторе.

Приготовление экстракта ядерного белка печени

Ядерный белок выделяли в соответствии с методом Kang et al. [23]. Ткань печени (0,5 г) гомогенизировали в буфере, содержащем 0,32 М сахарозы, 10 мМ Трис · HCl, pH 7,4, 1 мМ ЭГТА, 2 мМ ЭДТА, 5 мМ NaN 3 , 10 мМ β-меркаптоэтанол, 20 мкМ лейпептин, 0,15 мкМ пепстатина А, 0,2 мМ PMSF, 50 мМ NaF, 1 мМ ортованадат натрия и 0,4 нМ микроцистина. Гомогенаты центрифугировали (1000, г, , 10 мин). Осадки солюбилизировали в буфере Triton (1% Triton X-100, 150 мМ NaCl, 10 мМ Tris · HCl, pH 7. 4, 1 мМ EGTA, 1 мМ EDTA, 0,2 мМ ортованадата натрия, 20 мкМ лейпептина A, 0,2 мМ PMSF). Лизаты центрифугировали (15000 г , 30 мин, 4 ° C), и супернатант (ядерный экстракт) хранили при -80 ° C до использования. Концентрации белка оценивали с помощью анализа белка DC Bio-Rad (Hercules, CA).

Определение активности фактора транскрипции PPARα в печени

Активность фактора транскрипции PPARα в ядерных экстрактах печени определяли с использованием набора для анализа фактора транскрипции Cayman Chemical PPAR-α на основе ELISA (Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA), который обнаруживает PPAR-α связаны с двухцепочечными последовательностями ДНК, содержащими элемент ответа PPAR.Образец белка ядерного экстракта (40–50 мкг) использовали для определения активности PPARα с использованием протокола, описанного в руководстве по продукту, и оптическую плотность измеряли при 450 нм.

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка (S. E.M.). Статистический анализ был выполнен с применением одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки. Различия между группами считали достоверными при p <0,05.

Результаты

Влияние на вес эпидидимальной жировой ткани

Никаких существенных различий в массе тела и потреблении энергии между группами не наблюдалось (данные не показаны).Через восемь недель после применения диеты с высоким содержанием жиров вес эпидидимального жира у крыс HFD был значительно повышен (p <0,001) по сравнению с контрольными (SD) крысами (рисунок). Добавка ERC в течение восьми недель крысам HFD значительно снизила вес эпидидимального жира (p <0,05), тогда как добавление EGG или EPG не изменило эту характеристику.

Вес эпидидимальной жировой ткани крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), Punica granatum Punica granatum экстракт (EPG) и Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 10). Определяли статистическую значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD (# p <0,001) или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,01).

Влияние на тест толерантности к глюкозе и липиды крови

Уровень глюкозы в сыворотке был увеличен на 20,0% (p <0,05) у крыс HFD по сравнению с крысами SD (с 4,46 ± 0,16 до 5,34 ± 0,32 ммоль / л). Добавление ERC, но не EGG или EPG, значительно снизило базальный уровень глюкозы на 19.4% по сравнению с группой HFD (p <0,05; данные не показаны). Тест на толерантность к глюкозе внутрибрюшинно проводили в конце восьмой недели эксперимента. Уровни глюкозы в сыворотке в группе HFD были значительно выше через 60, 120 и 180 минут после нагрузки глюкозой по сравнению с группой SD, и все три изученных экстракта растений значительно изменили этот эффект через 60 минут и в каждый момент времени после этого (рисунок). В то же время рисунок демонстрирует, что уровни глюкозы в сыворотке были значительно ниже у крыс, получавших ERC (p <0. 05), чем у крыс, получавших EGG или EPG через 120 и 180 мин после нагрузки глюкозой.

Тест толерантности к глюкозе у крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), экстракт Punica granatum EPG) и экстракт Glycyrrhiza glabra (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.Э.М. (n = 10). Статистическая значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD (#p <0,001) или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,01), между крысами, получавшими HFD с добавлением ERC и EPG или EGG (& p < 0,05).

Как показано в таблице, HFD значительно увеличивал сывороточные уровни TC (p <0,001), TG (p <0,001), LDL-C (p <0,001) и FFA (p <0,001) по сравнению с SD, тогда как Содержание ХС-ЛПВП в сыворотке снизилось (р <0,05). Прием ERC заметно снизил уровни ТГ в сыворотке (на 22,6%, p <0,05), TC (на 18,0%, p <0,05), LDL-C (на 52,0%, p <0,01) и уровни FFA (на 32,4%, p <0,05) и восстановил уровень ХС-ЛПВП (на 37,0%, p <0,05), что указывает на то, что ERC обращает вспять дислипидемию, вызванную HFD (таблица). Некоторое улучшение липидных профилей было также отмечено для групп EGG (значительное снижение содержания TG и FFA на 25,0 и 27,0% соответственно) и EPG (значительное снижение уровня LDL-C на 26,0%) по сравнению с группой HFD.Остальные липидные показатели в группах EGG и EPG продемонстрировали слабую тенденцию к восстановлению, хотя и незначительную (p> 0,05).

Таблица 1

Содержание липидов в сыворотке крови (ммоль / л) у крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), Punica granatum экстракт (EPG) и Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель

систолическое артериальное давление

Достоверных различий нет (p> 0. 05) наблюдались при систолическом артериальном давлении в группах SD и HFD. Интересно, что HFD приводил к тенденции к снижению систолического артериального давления в конце восьмой недели (рисунок), хотя и незначительно (p> 0,05). Добавление EGG привело к значительному снижению систолического артериального давления на 12,0% (p <0,05) по сравнению с группой HFD. Как показано на рисунке, при добавлении ERC или EPG в группе HFD не наблюдалось значительной разницы по сравнению с группой HFD.

Систолическое артериальное давление у крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), Punica granatum

экстракт (EPG) и Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 10). Определяли статистическую значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,05).

Влияние на кортикостерон в сыворотке и надпочечниках

Как показано на рисунке А, концентрация кортикостерона в сыворотке была увеличена в 2,17 раза у крыс HFD по сравнению с крысами SD (p <0,01). Добавление HFD с ERC и EPG значительно ослабило повышение уровня кортикостерона на 27.0 и 30,0% соответственно (p <0,05) по сравнению с крысами HFD, в то время как потребление EGG не оказало значительного влияния на индекс. Уровни кортикостерона надпочечников в группе HFD были в 2,15 раза ниже, чем в группе SD (Рисунок B, p <0,001). Как показано на рисунке B, ERC восстановил содержание кортикостерона в надпочечниках на 25,0% (p <0,05). Напротив, добавки EGG и EPG не влияли на уровень кортикостерона в надпочечниках.

Концентрация кортикостерона в сыворотке (A) и надпочечниках (B) крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), Punica granatum экстракт (EPG) и Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 10). Определяли статистическую значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD (# p <0,001) или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,05).

Влияние на сывороточный TNF-α и IL-6

Как показано на рисунке, воздействие HFD на крыс в течение восьми недель приводило к 2,7- и 3,1-кратному увеличению содержания TNF-α и IL-6 в сыворотке соответственно. по сравнению с группой SD (p <0,001). Добавка ERC предотвращала индуцированное HFD повышение уровня TNF-α в сыворотке, снижая его значение на 61.6% (р <0,001). Напротив, EGG и EPG снижали уровень TNF-α в сыворотке в меньшей степени (на 32,0 и 24,0% соответственно, p <0,05), чем ERC (Рисунок A). Группа ERC достоверно отличалась от групп EGG и EPG по содержанию TNF-α (p <0,05). На рисунке B показано, что потребление ERC, EPG и EGG привело к значительному снижению уровня IL-6 в сыворотке на 48,4, 54,0 и 44,0% соответственно (p <0,01).

Концентрация сывороточного TNF-α (A) и IL-6 (B) у крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт ( ERC), Punica granatum экстракт (EPG) и экстракт Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 10). Статистическая значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD (# p <0,001) или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,05), между крысами, получавшими HFD с добавлением ERC и EPG или EGG (& p <0,001 ) был определен.

Влияние на содержание TG в печени и ДНК-связывающую активность PPARα

Концентрация TG в печени была значительно выше у крыс HFD, чем у крыс SD (p <0,001). Накопление ТГ было значительно снижено при добавлении всех трех изученных экстрактов трав (Рисунок A).Однако ERC смог снизить содержание ТГ в печени в большей степени (на 49,0% по сравнению с группой HFD, p <0,01), чем EPG (на 35,0%, p <0,01) и EGG (на 29,0%, p <0,05). . Накопление TG было связано со значительным снижением ДНК-связывающей активности PPARα в печени в группе HFD по сравнению с группой SD (Рисунок B). Известно, что активация PPARα улучшает метаболизм липидов в печени. Данные, представленные на рисунке B, подтверждают значительное восстановление активности связывания ДНК PPARα в группе ERC (на 48. 5%, p <0,01) по сравнению с группой HFD. Напротив, у крыс, получавших EGG и EPG, наблюдалось незначительное увеличение активности связывания ДНК PPARα (p> 0,05).

Содержание триацилглицерина в печени (A) и ДНК-связывающая активность PPARα (B) у крыс, получавших стандартную диету (SD), диету с высоким содержанием жиров (HFD) и HFD с добавлением Rhaponticum cathamoides экстракт (ERC), Punica granatum экстракт (EPG) и экстракт Glycyrrhiza glabra экстракт (EGG) (300 мг / кг в день) в течение 8 недель. Данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 10). Статистическая значимость различий между крысами, получавшими HFD и SD (# p <0,001) или HFD с добавлением ERC, EPG или EGG (* p <0,05), между крысами, получавшими HFD с добавлением ERC и EPG или EGG (& p <0,05 ) был определен.

Обсуждение

Кормление крыс HFD является полезным инструментом для индукции особенностей метаболического синдрома, включая характерное висцеральное ожирение, дислипидемию, нарушение толерантности к глюкозе при диабете 2 типа и стеатоз печени, которые обычно связаны с ожирением у людей. Эта крысиная модель ожирения, вызванного диетой, часто используется для исследования эффектов средств, улучшающих метаболический синдром, включая лекарственные растения, как возможных источников новых лекарств. Было обнаружено, что различные типы экстрактов и индивидуальных соединений, полученных из R. carthamoides , обладают широким спектром фармакологических эффектов [21,24-27]. Однако возможность того, что экстракты и отдельные соединения, полученные из R. carthamoides , могут подавлять проявление метаболического синдрома, мало изучена, в отличие от многих других трав, таких как G.glabra и P. granatum [13-20]. Наше сравнительное исследование, по-видимому, является первым доказательством более высокого потенциала коммерческого этанольного экстракта ERC, обогащенного 20-гидроксиэкдизоном, для снижения веса эпидидимальной жировой ткани и уровня глюкозы в сыворотке, для восстановления нарушений сывороточных липидов, кортикостерона и воспалительных цитокинов. содержание у крыс, получавших HFD, по сравнению с коммерческими этаноловыми экстрактами EGG и EPG, которые обогащены глицирризиновой кислотой и эллаговой кислотой, соответственно, и, как полагают, обладают противодиабетическими свойствами и свойствами против ожирения.Это исследование также показывает, что прием ERC может улучшить стеатоз печени, связанный с повышенной экспрессией активности PPARα по связыванию ДНК в печени.

Добавление ERC, EGG и EPG крысе HFD (300 мг / кг в день) не изменило массу тела крыс в нашем эксперименте. Однако вес эпидидимального жира был значительно снижен только с помощью ERC (рисунок). В настоящем исследовании ERC нормализовал уровень глюкозы в плазме и улучшил непереносимость глюкозы (рисунок), снизил LDL-C, TC, TG и FFA и увеличил содержание HDL-C (таблица) в значительно большей степени, чем EGG или EPG.Кроме того, ERC существенно не изменил систолическое давление у крыс (рисунок). ERC содержит относительно высокую концентрацию фитоэкдистероидов, в основном 20-гидроксиэкдизона (2,2% по данным ВЭЖХ). Различные экстракты и экдистероиды, полученные из R. carthamoides , широко используются в спортивной медицине в качестве анаболических веществ, усиливающих биосинтез в медленных мышечных волокнах. Значительное снижение веса эпидидимального жира без изменения веса тела и улучшение непереносимости глюкозы, наблюдаемое у крыс, получавших ERC (содержащий приблизительно 6.6 мг / кг в день 20-гидроксиэкдизона), скорее всего, связаны с активацией пентозофосфатного пути и использованием углеводов в синтезе белка, стимулируемом фитоэкдистероидами. Это предположение согласуется с уменьшением продукции глюкозы в печени и увеличением продукции адипонектина, как это было видно на мышах, получавших HFD с добавкой 10 мг / кг в день 20-гидроксиэкдизона [28]. Недавние испытания на овариэктомированных крысах также показали, что умеренные дозы 20-гидроксиэкдизона (18 мг / день на животное) увеличивают мышечную массу и уменьшают массу висцерального жира, снижают содержание ЛПНП в сыворотке, повышают содержание ЛПВП в сыворотке и не повышают содержание ТГ [29]. .

Хотя гипохолестеринемическое действие фитоэкдистероидов было продемонстрировано ранее [30], молекулярные механизмы, лежащие в основе эффектов ERC у млекопитающих, изучены недостаточно. Известно, что 20-гидроксиэкдизон является стероидным гормоном насекомых, который контролирует метаболизм липидов через специфический рецепторный комплекс рецептора экдизона (EcR) [31]. EcR являются ортологами фарнезоидных X рецепторов (FXR) и печеночных X рецепторов (LXR) [32], которые играют критическую роль в регуляции метаболизма липидов у млекопитающих.Имея в виду, что лиганд-связывающий домен EcR подобен крысиному FXR и обладает высокой гомологией с LXR [33], можно предположить, что эти рецепторы являются фармакологическими мишенями фитоэкдистероидов ERC или их метаболитов. Более того, взаимодействие LXR с гормон-чувствительными элементами в промоторах генов PPAR может обеспечивать взаимную координацию экспрессии этих факторов транскрипции.

Наше открытие значительного положительного воздействия ERC на стеатоз печени можно объяснить увеличением активности связывания ДНК PPARα в печени (рисунок). Механизмы этого действия ERC остаются неясными. Мы можем предположить, что это достигается за счет прямого взаимодействия фитостеринов с FXR, LXR или другими факторами транскрипции или косвенно (путем изменения гормонального фона в крови). В последнем случае повышение активности PPARα в печени может быть взаимосвязано со снижением уровня инсулина. Действительно, известно, что инсулин сильно подавляет уровень мРНК PPARα в гепатоцитах крыс [34]. Таким образом, снижение уровня инсулина под действием 20-гидроксиэкдизона может активировать PPARα и способствовать его печеночной активности, как это наблюдалось в настоящем исследовании.Также нельзя исключить, что продемонстрированные гиполипидемические эффекты (снижение содержания ТГ в сыворотке, СЖК и ТГ в печени) ERC могут быть связаны не только с фитостеринами, но также с индивидуальным или синергетическим действием флавоноидов и других активных фитохимических веществ растений.

Значительные данные исследований на людях [35,36] и моделей грызунов, получавших HFD [37,38], предполагают, что повышенные уровни глюкокортикоидов и провоспалительных цитокинов в крови или тканях играют решающую роль в развитии метаболического синдрома. В настоящем исследовании мы обнаружили, что ERC демонстрирует значительную способность снижать содержание кортикостерона в сыворотке и восстанавливать его содержание в надпочечниках (рисунок), а также снижать индуцированные HFD уровни TNF-α и IL-6 в сыворотке (рисунок), в то время как EGG и EPG показали значительно меньшую активность такого рода. Наши наблюдения согласуются с данными, полученными на культивируемых клетках HeLa, в которых ERC эффективно ингибирует ядерный фактор каппа B (NF-κB) [25], участвующий в клеточных ответах на воспалительные стимулы и стресс.Интересно, что 20-гидроксиэкдизон ингибировал активацию NF-κB менее эффективно, чем ERC [25], что указывает на присутствие других противовоспалительных соединений в ERC, которые более активны, чем 20-гидроксиэкдизон.

Хотя R. carthamoides содержит природные и малотоксичные соединения [21], ERC показал отличные результаты, не вызывая побочных эффектов, таких как диарея, и в настоящем исследовании ни одно из животных не погибло в ходе эксперимента (данные не показаны. ). В связи с этим в литературе есть сообщения о случаях, которые предполагают, что обильное употребление солодки может вызвать развитие гипокалиемии, отеков, гипертонии и тромбоцитопении [39].Эллаговая кислота (до 40,0% в изученных EPG) могла вызывать состояние гиперкоагуляции у мышей, крыс и кроликов [40]. Более того, экстракты граната, богатые эллаговой кислотой, имеют серьезный недостаток — они нестабильны в водных растворах [41].

Таким образом, комплексное действие этанольного экстракта ERC превосходит компенсаторное действие этанольных экстрактов EGG и EPG на кластер метаболических синдромов, и, таким образом, ERC может быть предложен для использования в качестве эффективного терапевтического варианта для пациентов, которые отказываются от низкотемпературного жирная диета для лечения метаболического синдрома.

Выводы

Наши результаты, полученные на модели HFD на крысах, предполагают, что ERC может предотвращать и улучшать признаки метаболического синдрома в результате комплексного положительного воздействия на абдоминальное ожирение, непереносимость глюкозы, дислипидемию, гепатоз, кортикостерон и провоспалительный цитокин. содержимое без видимых признаков или симптомов токсичности для крыс, что указывает на высокий запас прочности. Экстракт корней R. carthamoides проявлял комплексную полезную активность, которая превышала таковую коммерческих этанольных экстрактов G.glabra корней и растения P. granatum , обогащенных глицирризиновой кислотой и эллаговой кислотой, соответственно, с заявленными противодиабетическими свойствами и свойствами против ожирения. Соответственно, экстракт R. carthamoides , традиционно используемый в основном в качестве восстанавливающего вещества, расширен данными этого исследования, подтверждающими доказательства того, что натуральные ингредиенты R. carthamoides являются многообещающими кандидатами в лекарственные и пищевые компоненты для предотвращения или облегчения наиболее распространенных проявлений. кластерных заболеваний, связанных с образом жизни, вызванных обширной HFD.

Сокращения

EcR: рецептор экдизона; EGG: Экстракт G. glabra ; EPG: Экстракт P. granatum ; ERC: Экстракт R. carthamoides ; FFA: свободная жирная кислота; FXR: рецепторы Фарнезоида X; G. glabra: Glycyrrhiza glabra ; HDL-C: холестерин липопротеинов высокой плотности; HFD: диета с высоким содержанием жиров; IL-6: интерлейкин-6; LDL-C: холестерин липопротеинов низкой плотности; LXR: Х-рецепторы печени; P. granatum: Punica granatum ; NF-κB: ядерный фактор каппа B; PPARα: рецептор-α, активируемый пероксисомальным пролифератором; Р.carthamoides: Rhaponticum carthamoides ; SD: стандартная диета; TC: общий холестерин; ТГ: триацилглицерины; TNF-α: фактор некроза опухоли-α.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Вклад авторов

Все авторы внесли равный вклад в сбор данных. MD подготовил рукопись, и все авторы внесли свой вклад в дальнейшее написание рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Благодарности

Работа поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (11-04-00555а). Авторы выражают благодарность профессору Вере Селятицкой за помощь в измерении уровня кортикостерона.

Ссылки

  • Mottilo S, Filion KB, Genest J, Joseph L, Pilote L, Poirier P, Rinfret S, Schiffrin EL, Eisemberg MJ. Метаболический синдром и сердечно-сосудистый риск — систематический обзор и метаанализ. J Am Coll Cardiol. 2010. 56 (14): 1113–1132. DOI: 10.1016 / j.jacc.2010.05.034. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Перейра М.А., Коттке Т.Э., Джордан К., О’Коннор П.Дж., Пронк Н.П., Карреон Р.Предотвращение и управление кардиометаболическим риском: логика вмешательства. Int J Environ Res Public Health. 2009. 6 (10): 2568–2584. DOI: 10.3390 / ijerph6102568. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Дель Бен М., Баратта Ф., Полимени Л., Анджелико Ф. Неалкогольная жировая болезнь печени и сердечно-сосудистые заболевания: эпидемиологические, клинические и фатофизиологические данные. Intern Emerg Med. 2012; 7 (Приложение 3): S291 – S296. [PubMed] [Google Scholar]
  • Prasad H, Ryan DA, Celzo ​​MF, Stapleton D.Метаболический синдром: определение и терапевтическое значение. Postgrad Med. 2012; 124 (1): 21–30. DOI: 10.3810 / PGM.2012.01.2514. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Мичос Э.Д., Сибли К.Т., Баер Дж.Т., Блаха М.Дж., Блюменталь Р.С. Комбинированная терапия ниацином и статинами для регресса атеросклероза и предотвращения сердечно-сосудистых заболеваний: согласование исследования AIM-HIGH (Вмешательство атеротромбоза при метаболическом синдроме с низким уровнем ЛПВП / высоким уровнем триглицеридов: влияние на глобальные результаты здоровья) с предыдущими исследованиями суррогатных конечных точек.J Am Coll Cardiol. 2012. 59 (23): 2058–2064. DOI: 10.1016 / j.jacc.2012.01.045. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Nseir W, Mograbi J, Ghali M. Липидоснижающие агенты при нональкоголовой жировой болезни печени и стеатогепатите: исследования на людях. Dig Dis Sci. 2012. 57 (7): 1773–1781. DOI: 10.1007 / s10620-012-2118-3. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Filippatos TD. Обзор динамики и предикторов липидных изменений при комбинации фенофиброевой кислоты и статинов. Cardiovasc Drug Ther. 2012. 26 (3): 245–255.DOI: 10.1007 / s10557-012-6394-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Power M, Pratley R. Альтернативные и дополнительные методы лечения метаболического синдрома. Curr Diab Rep. 2011; 11 (3): 173–178. DOI: 10.1007 / s11892-011-0184-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Huang TH, Teoh AW, Lin BL, Lin DS, Roufogalis B. Роль травяных модуляторов PPAR в лечении кардиоматаболического синдрома. Pharmacol Res. 2009. 60 (3): 195–206. DOI: 10.1016 / j.phrs.2009.03.020.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Черняк Е.П. Полифенолы: посев семян лечения метаболического синдрома. Питание. 2011. 27 (6): 617–623. DOI: 10.1016 / j.nut.2010.10.013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Лакшмидеви Н., Махарадева М.С., Пракаш Х.С., Ниранджана С.Р. Диабет и лекарственные растения — обзор. Int J Pharm Biomed Sci. 2011. 2 (3): 65–80. [Google Scholar]
  • Babich JG, Pacioretty LM, Bland JS, Minich DM, Hu J, Tripp ML. Антидиабетический скрининг коммерческих растительных продуктов на 3 адипоцитах T3-L1 и мышах db / db.J Med Food. 2010. 13 (3): 535–547. DOI: 10.1089 / jmf.2009.0110. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Eu CH, Lim WY, Ton SH, bin Abdul Kadir K. Глицирризиновая кислота улучшает экспрессию липопротеинлипазы, чувствительность к инсулину, отложение липидов и липидов в сыворотке при ожирении, вызванном диетой с высоким содержанием жиров крысы. Lipid Health Dis. 2010; 9: 81. DOI: 10.1186 / 1476-511X-9-81. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Юнгбауэр А., Медьякович С. Фитоэстрогены и метаболический синдром.J Стероид Biochem Mol Biol. 2014. 139: 277–289. [PubMed] [Google Scholar]
  • Аль-Муаммар М.Н., Хан Ф. Ожирение: профилактическая роль питания граната (Punica granatum). 2012. 28 (6): 595–604. DOI: 10.1016 / j.nut.2011.11.013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Медьякович С., Юнгбауэр А. Гранат: фрукт, улучшающий метаболический синдром. Food Funct. 2013; 4: 19–39. DOI: 10.1039 / c2fo30034f. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Накагава К., Кишида Х., Араи Н., Нишияма Т., Мэй Т.Флавоноиды солодки подавляют накопление абдоминального жира и повышение уровня глюкозы в крови у мышей KK-A (y) с ожирением и диабетом. Биол Фарм Булл. 2004. 27 (11): 1775–1778. DOI: 10.1248 / bpb.27.1775. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Honda K, Kamisoyama H, Tominaga Y, Yokota S, Hasegawa S. Молекулярный механизм, лежащий в основе снижения накопления абдоминального жира флавоноидным маслом солодки у крыс с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жира. Anim Sci J. 2009; 80 (5): 362–569. [PubMed] [Google Scholar]
  • Parmar HS, Kar A.Противодиабетический потенциал экстрактов кожуры Citrus sinensis и Punica granatum у мышей-самцов, получавших аллоксан. Биофакторы. 2007. 31 (1): 17–24. DOI: 10.1002 / biof.5520310102. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Parmar HS, Kar A. Медицинские значения кожуры плодов Citrus sinensis, Punica granatum и Musa paradisiacal в отношении изменений перекисного окисления липидов в тканях и концентрации глюкозы, инсулина и сыворотки крови гормоны щитовидной железы. J Med Food. 2008. 11 (2): 376–381. DOI: 10.1089 / jmf.2006.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Кокоска Л., Яновска Д. Химия и фармакология Rhaponticum carthamodies: обзор. Фитохимия. 2009. 70 (7): 842–855. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2009.04.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Хара А., Радин Н.С. Липидная экстракция тканей малотоксичным растворителем. Анальная биохимия. 1978. 90 (1): 420–426. DOI: 10,1016 / 0003-2697 (78)

    -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

  • Кан X, Чжун В., Лю Дж., Сонг З., Макклейм С.Дж., Кан Ю.Дж., Чжоу З.Добавки цинка обращают вспять вызванный алкоголем стеатоз у мышей за счет реактивации ядерного фактора гепатоцитов-4-альфа и рецептора-альфа, активируемого пролифератором пероксисом. Гепатология. 2009. 50 (4): 1241–1250. DOI: 10.1002 / hep.23090. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Плотников М.В., Васильев А.С., Алиев О.И., Анищенко А.М., Краснов Е.А. Влияние экстакта Rhaponticum carthamodies в сочетании с дозовой физической нагрузкой на гемореологические показатели крыс с инфарктом миокарда.Эксп Клин Фармакол. 2011; 74 (9): 7–10. [PubMed] [Google Scholar]
  • Пешель В., Камп А., Прието Дж. М.. Влияние 20-гидроксиэкдизона, экстрактов Leuzea carthamodies, дексаметазона и их комбинаций на активацию NF-κB в клетках HeLa. J Pharm Pharmacol. 2011. 63 (11): 1483–1495. DOI: 10.1111 / j.2042-7158.2011.01349.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Nosá R, Perečko T., Jančinová V, Drábiková K, Harmatha J, Sviteková K. Естественно возникающие изомеры N-ферулосеротонина подавляют окислительный взрыв нейтрофилов человека на уровне протеинкиназы C.Pharmacol Rep.2011; 63 (3): 790–798. [PubMed] [Google Scholar]
  • Колекар В., Оплетал Л., Макакова К., Яходар Л., Джун Д., Кунес Дж., Куча К. Новые антиоксиданты фловоноид, выделенный из Leuzea carthamoides. J Enzyme Inhib Med Chem. 2010. 25 (1): 143–145. DOI: 10.3109 / 147563600970. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Кизельштейн П., Говорко Д., Комарницкий С., Эванс А., Ван З., Чефалу В. Т., Раскин И. 20-гидроксиэкдизон снижает вес и снижает гипергликемию на модели мышей с ожирением, вызванным диетой.Am J Physiol Endocrinol Metab. 2009. 296 (3): 433–439. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Зейдлова-Виттке Д., Эрхард С., Вуттке В. Метаболические эффекты 20-ОН-экдизона у крыс с удаленными яичниками. J Стероид Biochem Mol Biol. 2010. 119 (3–5): 121–126. [PubMed] [Google Scholar]
  • Миронова В.Н., Холодова И.Д., Скачкова Т.Ф., Бондарь О.П., Даценко З.М. Гипохолестеринемический эффект фитоэкдизонов при экспериментальной гиперхолестеринемии у крыс. Вопр Мед Хим. 1982. 28 (2): 101–105. [PubMed] [Google Scholar]
  • Ван С., Лю С., Лю Х., Ван Дж., Чжоу С., Цзян Р.Дж., Бендена В.Г., Ли С.20-гидроксиэкдизон снижает потребление пищи насекомыми, что приводит к липолизу жирового тела во время линьки и окукливания. J Mol Cell Biol. 2010. 2 (3): 128–138. DOI: 10,1093 / jmcb / mjq006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • King-Jones K, Thummel CS. Ядерные рецепторы — перспектива от Drosophila. Nat Rev Genet. 2005. 6 (4): 311–323. DOI: 10,1038 / nrg1581. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Kumpun S, Girault JP, Dinan L, Blais C, Maria A, Dauphin-Villemant C, Yingyongnarongkul B, Suksamrarn A, Lafont R.Метаболизм 20-гидроксиэкдизона у мышей: актуальность для фармакологических эффектов и применения экдистероидов для переключения генов. J Стероид Biochem Mol Biol. 2011; 126 (1–2): 1–9. [PubMed] [Google Scholar]
  • Steinberg HH, Sorensen HN, Tugwood JD, Skrede S, Spydevold O, Gautvik KM. Дексаметазон и инсулин демонстрируют резкую и противоположную регуляцию устойчивого уровня мРНК рецептора, активируемого пероксисомальным пролифератором, в клетках печени. Гормональная модуляция транскрипции, индуцированной жирными кислотами.Eur J Biochem. 1994. 225 (3): 967–974. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1994.0967b.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Анагностис П., Атирос В.Г., Циомалос К., Карагианнис А., Михайлидис Д.П. Клинический обзор: патогенетическая роль кортизола в метаболическом синдроме: гипотеза. J Clin Endocrinol Metab. 2009. 94 (8): 2692–2701. DOI: 10.1210 / jc.2009-0370. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Скарпеллини Э., Тэк Дж. Ожирение и метаболический синдром: воспалительное состояние. Dig Dis. 2012. 30 (2): 148–153.DOI: 10,1159 / 000336664. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Pratchayasakul W., Kerdphoo S, Petsophonsakul P, Pongchaidecha A, Chattipakorn N, Chattipakorn SC. Влияние диеты с высоким содержанием жиров на функцию рецепторов инсулина в гиппокампе крыс и уровень нейронального кортикостерона. Life Sci. 2011. 88 (13–14): 619–627. [PubMed] [Google Scholar]
  • Fu JH, Xie SR, Kong SJ, Wang Y, Wei W, Shan Y, Luo YM. Сочетание диеты с высоким содержанием жиров и хронического стресса усугубляет инсулинорезистентность у самцов крыс линии Вистар.Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2009. 117 (7): 354–360. DOI: 10,1055 / с-0028-1119406. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Celic M, Karakus A, Zeren C., Demir M, Bayarogullari H, Duru M, Al M. Солодка вызывала гипокалиемию, отек и тромбоцитопению. Hum Exp Toxicol. 2012. 31 (12): 1295–1298. DOI: 10.1177 / 0960327112446843. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Na L, Цзюнь-тянь Л., Цян-цзун З. Состояние гиперкоагуляции у животных, индуцированное эллаговой кислотой: потенциально полезная модель гиперкоагуляции на животных для оценки антикоагулянтов.Clin Med Sci J. 2010; 25 (4): 237–242. [PubMed] [Google Scholar]
  • Panichayupakaranant P, Itsuriya A, Sirikatitham A. Метод приготовления и стабильность экстракта кожуры плодов граната, богатого эллаговой кислотой. Pharm Biol. 2010. 48 (2): 201–205. DOI: 10.3109 / 138802008503. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Острые и хронические эффекты добавок экстрактов Rhaponticum carthamoides и родиолы розовой в сочетании с упражнениями с отягощениями на синтез мышечного белка и механическую силу у крыс | Журнал Международного общества спортивного питания

Этика и уход за животными

Это исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментов на животных Лангедока-Руссильона в соответствии с руководящими принципами Французского национального исследовательского совета по уходу и использованию лабораторий. Животные (номер разрешения APAFIS № 713-201505261345689v3).Крыс Wistar Han приобретали у Charles River (Charles River Laboratories, L’Arbresle, Rhône, France). Их содержали парами (клетка Евростандарта типа III H) при постоянной комнатной температуре (21 ° C ± 1,5) и поддерживали в режиме 12/12 ч свет / темнота. Деревянные палочки (крысы Top Brick, SAFE, Augy, Франция) добавляли для обогащения во время выращивания и экспериментов. Животных акклиматизировали в течение 1 недели перед экспериментальными процедурами с ежедневным обращением.

Дизайн исследования в остром периоде

Животные

Крысы Wistar Han в возрасте одиннадцати недель ( n = 56) получали специализированную 10% -ную диету с низким содержанием белка A04 (30 г / день; содержание белка, антиоксидантов и витаминов до имитировать самостоятельно принимаемый необогащенный рацион человека), полученный от Scientific Animal Food & Engineering (SAFE, Augy, France), и воду давали ad libitum.В первый день эксперимента крысы были 12-недельного возраста (315 +/- 10 г) и считались взрослыми.

Крыс случайным образом распределяли в одну из 7 групп ( n = 8 на группу), определяемых добавочным лечением, как показано в таблице 1. Дозы для животных были выбраны на основе доз для человека.

Таблица 1 Эквивалентные дозы для человека (HED), вводимые различным группам животных в остром исследовании
Упражнения с отягощениями и введение добавок

Крыс тренировали на аппарате, адаптированном из предыдущего исследования [11].В нашей лаборатории изготовлена ​​лестница высотой 1 м с шагом сетки 2 см и наклоном 85 °. Сначала крыс приучали к лестнице, добровольно перелезая по ней снизу вверх в течение 1 недели без дополнительной нагрузки. Во время эксперимента тканевые мешки с грузами прикрепляли к основанию хвоста с помощью липучки. После 1 недели ознакомления восемь крыс были случайным образом распределены в каждую из семи групп, как определено выше. В день эксперимента прием пищи прекращался за 4 ч до единственной тренировки.Крысы в ​​каждой группе совершили 10 подъемов без дополнительной нагрузки, а затем совершили 10 подъемов, неся 50 и 75% своей массы тела. Между каждым подъемом крысам давали отдыхать в течение 2 минут, и им давали отдыхать в течение 5 минут между двумя подходами по 10 подъемов. Сразу после единственной тренировки с отягощениями крыс помещали в клетки, в которые вводили добавку, и держали голодными до анестезии (крысам был предоставлен только свободный доступ к воде).

Rhaponticum carthamoides и Экстракты Rhodiola rosea L., использованные в этом исследовании, были любезно предоставлены Naturex (Авиньон, Франция) и были приготовлены в соответствии с запатентованным методом (US9700589B2, WO2016 / 125025). Водно-спиртовой экстракт родиолы стандартизирован для содержания розавинов> 2% (канифоль, розарин и розавин) и, кроме того, содержит минимум 1% салидрозида. Rhaponticum водно-спиртовой экстракт содержал 20-гидроксиэкдизон (20HE) или β-экдизон (0.4%) и другие фитоэкдистероиды (всего 0,7%).

Rhaponticum и Экстракты родиолы и различные комбинации обоих ( Rha + Rho) вводили сразу после физической нагрузки через желудочный зонд (2 мл). Растворы готовили для немедленного приема в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе (КМЦ).

Взятие образцов мышц и экстракция белка

Через два часа после введения добавки через желудочный зонд крысам внутрибрюшинно вводили 10 мМ пуромицин (100 мкл раствора пуромицина / 25 г массы тела, Sigma Aldrich, Saint-Louis, Missouri, USA).Через двадцать пять минут после инъекции пуромицина животных умерщвляли внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала 150 мг / кг -1 (Pentobarbital®, Ceva, Libourne, France). Через 30 минут после инъекции пуромицина были взяты глубокий сгибатель пальцев правой руки (FDP), дельтовидная мышца и двуглавая мышца, замороженные в изопентане, охлаждаемом азотом, и сохранены при -80 ° C до проведения биохимического анализа. Двадцать миллиграммов каждой мышцы гомогенизировали в 10 объемах буфера для лизиса (20 мМ Трис при pH 7.5, 150 мМ NaCl, 2 мМ EDTA, 1% Triton X-100) с коктейлями из ингибиторов протеаз (P8340, Sigma Aldrich). Гомогенат центрифугировали при 10000 × g в течение 10 мин при 4 ° C и собирали супернатант.

Измерение синтеза белка

Синтез белка измеряли путем определения трансляции на поверхности, как описано ранее [12]. Включение пуромицина в белки оценивали методом иммуноблоттинга на 4–20% акриламидных гелях. Образцы белка (50 мкг) денатурировали, разделяли с помощью 10% SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозные мембраны.Первичное антитело против пуромицина (антитело против пуромицина (1/3000), клон 12D10 от EMD Millipore, Burlington, Massassuchets, USA) наносили в течение ночи при 4 ° C, а затем мембрану инкубировали со вторичным антителом (1/4000). ), конъюгированный с пероксидазой (антимышиный IgG; ECL от GE Healthcare UK Limited, Амершам, Великобритания). Оптическую плотность всей полосы образца оценивали и нормализовали с помощью окрашивания общего белка Ponceau S.

Дизайн хронического исследования

Животные

Одиннадцатинедельные крысы Wistar Han ( n = 40) получали 30 г / день специализированного низкобелкового корма A04, ранее разработанного и полученного от SAFE (Augy, Франция ), а воду давали ad libitum.В первый день эксперимента крысы были 12-недельного возраста (334,4 ± 10 г) и считались взрослыми.

Согласно результатам, полученным во время острой фазы исследования, мы сохранили смешанную дозу Rha + Rho , которая оказала большее влияние на синтез белка, т.е. HED = 500 мг (50–50%). Были определены четыре группы, которым проводилось лечение, как показано в таблице 2.

Таблица 2 Эквивалентные дозы для человека (HED), использованные для кормления различных групп животных в хроническом исследовании
Протокол тренировки с отягощениями и введение добавок

Все крысы из четырех групп прошли 4-недельную программу прогрессивных упражнений с отягощениями с дополнительными нагрузками .Упражнение состояло в самопроизвольном подъеме по лестнице высотой 1 м с шагом сетки 2 см и наклоном 85 °. Каждая тренировка состояла из одного подхода из 20 повторений с 2-минутным отдыхом между попытками (5-минутный отдых после 10-го упражнения, середина упражнения). Крысы в ​​одной клетке обучались вместе. Тренировки проводились 5 раз в неделю, порядок групп менялся. Во время эксперимента тканевые мешки с грузами прикрепляли к основанию хвоста с помощью липучки.За три дня до тренировки крыс приучали к лестнице, выполнив 3 подъема без дополнительной нагрузки. В день 1 эксперимента дополнительная нагрузка составляла 50% от массы тела крысы, а через 4 недели нагрузка постепенно увеличивалась до 150% от массы тела крысы. Добавки вводили сразу после каждой тренировки через желудочный зонд (2 мл). Растворы готовили экстемпорально каждое утро. Наполнитель представлял собой 0,5% КМЦ.

Тренировочная работа и количественная оценка производительности

Тренировочная работа (TW; в J) была рассчитана как потенциальная работа, разработанная во время тренировок, с использованием следующего уравнения:

$$ \ mathrm {TW} = \ left (\ mathrm {mload} + \ mathrm {mrat} \ right) \ ast \ mathrm {g} \ ast \ Delta \ mathrm {h} \ ast \ mathrm {N} $$

где m выражается в кг, g — постоянная силы тяжести на Земле, выраженная в м.s — 2 , Δh — пройденное расстояние в м, N — количество повторений.

Производительность была представлена ​​выходной механической мощностью за весь сеанс лазания, рассчитанной как работа, выполненная против силы тяжести (TW), деленная на общее время (с) подъема и выраженная в Вт:

$$ \ mathrm {Производительность} = \ mathrm {TW} / \ mathrm {время}. $$

Прирост мощности между началом и концом тренировочной программы был рассчитан как разница между средними значениями производительности в 3 последних дня и 3 первых дня тренировочной программы.Полный протокол был описан ранее [11].

Тест на максимальное количество повторений

В последний день эксперимента крысы выполняли тест на максимальное количество повторений (1-RM), чтобы определить максимальное усилие, которое крыса может произвести после 19 тренировок; это значение соответствует максимальной нагрузке (дополнительная нагрузка + масса тела), которую может поднять животное. Упражнение состояло из подъема по лестнице с прогрессивно увеличивающейся нагрузкой (10% прироста МТ), начиная с 200% массы тела до отказа, с 5-минутным отдыхом между каждым подъемом.

Образцы мышц

Между 72 часами и 96 часами после окончания программы тренировок собирали мышцы (правый и левый FDP, дельтовидные и двуглавые мышцы). Крыс умерщвляли внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала (150 мг / кг). Мышцы взвешивали и немедленно замораживали в жидком азоте для биохимических исследований. Все образцы хранили при -80 ° C.

Площадь поперечного сечения мышцы и распределение типов волокон

Поперечные серийные срезы мышцы FDP (толщиной 10 мкм) получали с использованием криостата, поддерживаемого при -25 ° C (HM-560, Microm H, Thermo Scientific, Waltham, Massassuchets, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ).Срезы хранили при -20 ° C до гистохимического окрашивания. Перед маркировкой срезы сушили и фиксировали 10 мин в ацетоне. Затем срезы промывали PBS, блокировали и повышали проницаемость с помощью PBS 0,1% Triton X-100 и 20% лошадиной сыворотки.

Для определения площади поперечного сечения (CSA) срезы инкубировали в течение 1 часа с кроличьими антителами против ламинина (1/400) (Sigma Aldrich, Saint-Louis, Missouri, USA), промывали и затем инкубировали с вторичное антитело, конъюгированное с ALEXA 488 (козье антитело против кролика, Sigma, 1: 800).

Для определения типа мышечных волокон срезы инкубировали с первичными антителами против MHC (анти-медленный (I) MyHC, BA-D5, банк гибридом исследований развития, 1:10 и анти-быстрый (II) MyHC, M4276, Sigma-Aldrich, 1: 200) в течение 1 ч при 37 ° C с последующими промывками в PBS и инкубацией со вторичными антителами (1/800) (ALEXA 488; ALEXA 568, A11031, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). за 1 ч.

Срезы сканировали с использованием Nanozoomer (Hamamatsu), CSA и типирования волокон и определяли с помощью программного обеспечения ImageJ® (версия 1.46р).

Статистический анализ

Все значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. Нормальность распределений проверяли с помощью теста Шапиро-Уилка. Поскольку исследуемые переменные показали нормальное распределение и аналогичную дисперсию среди групп, эффекты были проанализированы с помощью двухфакторного дисперсионного анализа. В случае значительного эффекта взаимодействия проводились апостериорные тесты LSD Фишера. В противном случае данные анализировались непараметрическими тестами множественных сравнений Краскела-Уоллиса и Данна.Анализы выполняли с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (Prism 8, программное обеспечение GraphPad, Ла-Холья, Калифорния, США). Уровень статистической значимости был установлен на уровне p <0,05.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Левзея лекарственная (жидкий экстракт): особенности применения

Впервые левзею начали высаживать в 1816 году в Лондонском саду. Как позже выяснилось, это травянистое альпийское растение не только имеет привлекательный внешний вид, но и обладает лечебными свойствами.Встречается в автономном округе Алтайского края, в Восточном Саяне и Южной Сибири. На высоте 2000 м растет мараловая трава, которую еще называют левзея.

Лечебные качества

В медицине используются корни, лекарственное сырье которых — чаще всего настойки, экстракты и отвары. В корневищах содержатся флавоноиды, дубильные вещества, каротин, аскорбиновая кислота, инулин, камеди, эфирное масло. Благодаря такому богатому химическому составу левзея (жидкий экстракт) может излечить человека от различных недугов, а также приумножить силу организма.

Недаром народные целители называют это растение природным адаптогеном, так как оно обладает тонизирующим, общеукрепляющим и стимулирующим действием. Рекомендуется левзей (жидкий экстракт) людям, деятельность которых связана с тяжелыми физическими нагрузками. Лекарство повышает иммунитет, улучшает самочувствие, снимает усталость и стимулирует умственную работу.

Применяется при гипотонии, переутомлении, нервной возбудимости, астении и депрессии. Подготовленное сырье способствует быстрой акклиматизации перед экзаменами.Обладает сосудорасширяющими свойствами, а также нормализует кровообращение и обменные процессы. Кроме того, левзея (жидкий экстракт) помогает снизить уровень сахара в крови, поэтому рекомендуется при сахарном диабете.

С помощью этого дара природы целители борются с бессонницей, алкогольной зависимостью, чрезмерной раздражительностью и даже импотенцией. Клинические исследования доказали, что он улучшает память и концентрацию левзеи (жидкий экстракт). Цена на препарат невысокая, она колеблется в пределах 65 рублей за флакон 50 мл.

Заявление

Препарат не является лекарственным средством. Может применяться совместно с медикаментозной терапией. Назначен при:

— истощение, слабость, астения;

— физическое и умственное перенапряжение;

— стресс, депрессия;

— Реабилитация после перенесенных заболеваний;

— хронический алкоголизм;

— снижение потенции.

После 20-дневного курса нормализуется аппетит, сон, настроение. Экстракт применяют по 30 капель во время еды (трижды в день).

Кто против Левзеи?

Жидкий экстракт нельзя принимать детям, не достигшим возраста 12 лет. Препарат не рекомендуется применять при эпилепсии, аритмии, стенокардии, атеросклерозе, артериальной гипертензии, гиперчувствительности к компонентам. Воздерживаться от него необходимо беременным и кормящим женщинам. В любом случае перед применением лейзеи следует проконсультироваться с врачом.

Жидкий экстракт: отзывы потребителей

Множество положительных характеристик дает этот препарат.Восторженно отзываются об этом спортсмены и бодибилдеры. По их словам, добавка придает силы, бодрости и энергии. После его применения снимается утомляемость и раздражительность. Многие советуют использовать это средство в межсезонье, после длительного лечения и в стрессовых ситуациях.

границ | Антидепрессантоподобные эффекты экстракта кумароилспермидина из остатков инъекций сафлора

Графическое резюме Антидепрессантные эффекты экстракта кумароилспермидина из остатков традиционной китайской медицины (инъекции сафлора).

Введение

Влияние традиционной китайской медицины (ТКМ) возрастает во всем мире вместе с опасениями, что остатки ТКМ (TCMR) могут подорвать нашу окружающую среду (Ma et al., 2019). За последние несколько десятилетий объем утилизации TCMR резко вырос, в среднем превысив 70 миллионов тонн в год в Китае (Wang and Feng, 2009; Zhou et al., 2018). Сообщалось, что после экстракции водой или этанолом следы активных компонентов могут все еще оставаться в отходах TCMR (Liu et al., 2016; Wang et al., 2018). Однако, используя современные методы, TCMR обычно утилизируют после того, как целевой ингредиент был экстрагирован, поскольку остатки считаются побочными продуктами TCM. Например, некоторые TCMR используются в качестве наполнителей для компостирования пищевых отходов, в то время как активные ингредиенты, такие как белки, все еще остаются в остатках (Ma et al., 2019). Выход полисахаридов, экстрагированных из остатков Schisandra chinensis, , может достигать ~ 5% при использовании подходящего метода экстракции (Youn and Noh, 2001; Zhou et al., 2014). Кроме того, TCMR, которые содержат большое количество воды вместе с некоторыми питательными веществами, обычно выбрасываются вместе с твердыми отходами, что приводит к серьезному загрязнению окружающей среды (Tian et al., 2017; Zhang et al., 2017). Следовательно, рациональная переработка TCMR и расширение этой практики в отрасли важны для устойчивого развития окружающей среды.

Министерство здравоохранения Китая зарегистрировало инъекцию сафлора как официальное лекарство, которое используется для лечения окклюзионных цереброваскулярных заболеваний, ишемической болезни сердца и васкулита.Его готовят с помощью процессов водной экстракции и осаждения спиртом, в которых гидроксил сафлоровый желтый-A и общие флавоноиды используются в качестве стандартов контроля качества (Ao et al., 2018). В результате этого процесса образуются остатки, содержащие высокие концентрации активных соединений. Поэтому было бы полезно изучить остаток лекарства, чтобы его можно было использовать, а не тратить впустую.

Спермидин представляет собой полиамин природного происхождения, который участвует в заболеваниях, включая повреждение нервов, сердечно-сосудистые и мышечные заболевания, индукцию аутофагии и митофагии, а также воспаление (Eisenberg et al., 2009; Мадео и др., 2018). В 2018 году в журнале Science был опубликован обзор под названием «Спермидин в отношении здоровья и болезней». В этом обзоре авторы обсуждают свойства спермидина как хорошо переносимого миметика ограничения калорийности и его использование для борьбы с различными возрастными невзгодами с молекулярной и физиологической точки зрения (Madeo et al., 2018). Однако о том, эффективен ли спермидин при депрессии, в литературе не сообщалось.

В нашем предыдущем исследовании мы получили четыре соединения кумароилспермидина с тремя различными кумароильными группами ( 1 : N1, N5, N10- ( Z ) -три-пара-кумароилспермидин, 2 : N1, N5- ( Z ) -N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин, 3 : N1- ( E ) -N5- ( Z ) -N10- ( E ) -tri-p- кумароилспермидин и 4 : N1, N5, N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин) из остатков инъекций сафлора (структура см. рис. 1).Эти соединения продемонстрировали явное ингибирование обратного захвата 5-HT в синаптосомах головного мозга крысы, демонстрируя, что правильная рециркуляция остатков может давать активные компоненты, которые могут иметь терапевтическое значение (Yuan et al., 2015). В этом исследовании мы получили общий экстракт кумароилспермидина (CSE), который включал четыре соединения кумароилспермидина из остатков инъекций сафлора. Общее содержание кумароилспермидина в CSE составляло 64,86 ± 0,41%, а выход CSE превышал 85%. Кроме того, CSE продемонстрировал антидепрессивный эффект в предэкспериментальном тесте подвешивания за хвост на мышах.Известно, что депрессия — это хроническое психологическое заболевание с генетической тенденцией, вызванной сочетанием факторов. Патогенез и патофизиологические характеристики депрессии все еще не очень ясны, но нарушения нейротрансмиттеров считаются основным патогенезом депрессии (Palazidou, 2012; Joca et al., 2015). Поэтому мы предположили, что CSE может иметь антидепрессивный эффект, и мы использовали модель CUMS, чтобы оценить его антидепрессивный эффект и изучить механизм его действия.Есть надежда, что это исследование не только обнаружит депрессивный эффект CSE, но также предоставит возможность для использования с высокой добавленной стоимостью остатков инъекций сафлора.

Рисунок 1 Структура четырех кумароилспермидинов в CSE. N1, N5, N10- ( Z ) -три-п-кумароилспермидин ( 1 ), N1, N5- ( Z ) -N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин ( 2 ), N1- ( E ) -N5- ( Z ) -N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин ( 3 ) и N1, N5, N10- ( E ) — три-п-кумароилспермидин ( 4 ).

Материалы и методы

Химические вещества и материалы

Колоночную хроматографию (CC) проводили на диоксиде кремния RP-C18 (50-75 мкм, Merck). Капсулы венлафаксина гидрохлорида были приобретены у Chengdu KangHong Pharmaceutical Group Co., Ltd. (№ 180501). D 2 O (Merck reagents Co., Ltd., Америка), карбоксиметилцеллюлоза натрия (CMC-Na, Tianjin Kaitong Chemical Reagent Co., Ltd, Китай), хлоралгидрат (аналитическая чистота), метанол хроматографической чистоты, высокий для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) ацетонитрил и метановая кислота для ВЭЖХ.Наборы ELISA для кортикостерона (CORT), адренокортикотропного гормона (ACTH) и кортикотропин-рилизинг-гормона (CRH) были приобретены у Westang Biological Technology Co., Ltd (Шанхай, Китай). Остатки сафлора для инъекций были приобретены у Shanxi Huawei Pharmaceutical Co., Ltd, которая является основным производителем инъекций сафлора (номер партии SHHW20161108065T). Сафлор собирали в уезде Юминь, провинция Синьцзян (географические координаты: 82 ° 15’00 » ~ 83 ° 30’00 » восточной долготы, 45 ° 24’00 » ~ 46 ° 30’00 » северной широты).Стандарты соединений ( 1 ): N1, N5, N10- ( Z ) -три-п-кумароилспермидин, ( 2 ): N1, N5- ( Z ) -N10- ( E ) ) -три-п-кумароилспермидин, ( 3 ): N1- ( E ) -N5- ( Z ) -N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин и ( 4 ) : N1, N5, N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин были получены нашей группой с чистотой> 95%.

Получение CSE

Высушенные остатки сафлора (200 г) кипятили с 75% EtOH (6 л × 3 × 2 ч).Экстракцию фильтруют, затем концентрируют до 200 мл на роторном испарителе при 50 ° C и центрифугируют с получением осадка. Осадок растворяли в 20% этаноле и затем подвергали колоночной хроматографии на RP-C18 с элюированием H 2 O и ступенчатым градиентом EtOH с получением пяти фракций: Fr1 (чистый H 2 O), Fr2 (H 2 O-EtOH = 8: 2), Fr3 (H 2 O-EtOH = 1: 1), Fr4 (H 2 O-EtOH = 2: 8) и Fr5 (чистый EtOH). F3 концентрировали и сушили с получением CSE (желтый порошок).Общее содержание кумароилспермидина (включая соединения 1 4 ) в CSE определяли с помощью ВЭЖХ. Общий выход соединений кумароилспермидина рассчитывали по следующему уравнению:

Выход (%) = Σ общее содержание кумароилспермидина для CSE общее содержание кумароилспермидина для остатков инъекций сафлора * 100%

Определение общего содержания кумароилспермидина A

Метод, включающий подготовку образца и валидацию метода, был ранее определен нашей группой (Li et al., 2016). Общее содержание соединения кумароилспермидина в CSE измеряли с помощью аппарата HPLC-DAD (Agilent 1260). Колонку проводили на колонке Zorbax XDB C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм). Подвижная фаза представляла собой метанол-вода с объемным соотношением 55% (MeOH: H 2 O), длина волны детектирования составляла 270–300 нм. Температура колонки составляла 25 ° C. Скорость потока и объем впрыска составляют 1 мл / мин и 10 мл соответственно. Калибровочные кривые четырех соединений кумароилспермидина представлены во вспомогательном материале.

Животные

Всего 60 взрослых крыс-самцов SD (весом 180–220 г) были приобретены в Пекинской лаборатории жизнедеятельности (номер лицензии SCKX-2016-0006) и адаптированы к новой среде в течение 1 недели. По пять крыс помещали в каждую клетку в контролируемых условиях помещения для разведения (температура: 24 ± 1 ° C, влажность: 60 ± 5%) со свободным доступом к пище и воде. Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по этике экспериментальных животных Университета Шаньси. Все экспериментальные процедуры в настоящем исследовании были выполнены в соответствии с Руководством NIH по уходу и использованию лабораторных животных (США) и Законом Китая о предотвращении жестокого обращения с животными (1986).

Процедуры хронического непредсказуемого легкого стресса (CUMS)

Процедуры CUMS были выполнены, как описано ранее, с некоторыми изменениями (Tian et al., 2015). Крыс подвергали воздействию модели CUMS в течение 4 недель подряд на протяжении всего эксперимента. Процедуры CUMS состояли из девяти стрессоров: (1) 2-минутное защемление хвоста (1 см от проксимального конца хвоста), (2) 5-минутное холодное плавание при 4 ° C, (3) 24 часа лишения пищи, (4 ) 24 часа водного лишения, (5) 5 минут воздействия горячей среды (45 ° C), (6) 24 часа смены дня и ночи, (7) удар стопы (36 мВ с продолжительностью 10 с). для каждого шока), (8) связывание бутылок (3 ч) и (9) ультразвуковая стимуляция (3 ч).Все крысы в ​​группах CUMS в это время находились под одной и той же комбинацией стрессоров. Все крысы получали каждую случайную комбинацию стрессоров 1–9 в неделю (Подробная информация об использовании стимулирующих факторов в эксперименте показана на рисунке 2).

Рисунок 2 Схематическая диаграмма экспериментальной процедуры, как описано в Материалы и методы . Стимулирующие факторы, включая защемление хвоста, холодное плавание, лишение пищи, лишение воды, ⑤ воздействие жаркой окружающей среды, изменение дня и ночи, ⑦ шок стопы, связывание бутылок и ⑨ ультразвуковая стимуляция.SPT (предпочтение сахарозы), OPT (тест открытого поля) и Weight (масса тела). Крыс умерщвляли на 29-й день.

Медикаментозное лечение

Шестьдесят крыс были случайным образом разделены на шесть групп, по 10 крыс в каждой группе: (1) контрольная группа (Con): без какого-либо лечения или стресса; (2) Группа моделей CUMS (Mod): только стресс CUMS; (3) группа с низкой дозировкой CSE (8,65 мг / кг массы тела, CSE-L): лечение CSE-L и стресс CUMS; (4) группа средней дозы CSE (17,30 мг / кг массы тела, CSE-M): лечение CSE-M и стресс CUMS; (5) высокая дозировка CSE (34.60 мг / кг массы тела, CSE-H) группа: лечение CSE-H и стресс CUMS; и (6) группа венлафаксина (35,00 мг / кг массы тела, Ven): лечение венлафаксином и стресс CUMS. Для CSE была приготовлена ​​суспензия с CMC-Na и дистиллированной водой, которую вводили внутрижелудочно каждое утро в 7: 30–8: 00 и продолжали в течение 4 недель подряд. И группа Con, и группа Mod получали одинаковый объем физиологического раствора. Все десять крыс в каждой группе были подвергнуты всем поведенческим тестам. После экспериментов мозг и сыворотка были собраны для следующего исследования.

Поведенческие тесты

Масса тела

Измерения массы тела проводились соответственно на неделе 0 (перед процедурой CUMS) и на 1, 2, 3 и 4 неделе (во время и после процедуры CUMS).

Тест предпочтения сахарозы (SPT)

До теста оставалось семьдесят два часа. Во время периода акклиматизации, в течение первых 24 часов, крысы могли получить две бутылки с 1% раствором сахарозы, а в течение вторых 24 часов вместо них давали одну чашку раствора сахарозы с водопроводной водой.Затем на третьи сутки крыс лишали пищи и воды. Процедура тестирования была такой же, как и в предыдущем исследовании (Tian et al., 2013), при котором крысам давали бутылку с водой из-под крана и бутылку раствора сахарозы соответственно для определения исходного уровня предпочтения сахарозы. Через 4 часа показатель предпочтения сахарозы был рассчитан с использованием следующего уравнения:

Показатель предпочтения сахарозы = потребление сахарозы общее потребление жидкости * 100%

SPT проводился соответственно на неделях 0, 1, 2, 3 и 4 (до, во время , и после процедуры CUMS).

Тест открытого поля (OFT)

Двигательную активность оценивали с помощью теста открытого поля, как описано ранее (Tian et al., 2013). Инструмент представлял собой черный железный ящик (100 × 100 × 40 см), дно которого разделено на 5 * 5 = 25 частей эквивалентного размера, отмеченных белыми линиями, а средняя часть представляет собой центральный квадрат. Каждую крысу помещали в центр и позволяли свободное исследование в течение 5 мин. Количество скрещиваний, количество вставок и время автономной работы крыс проверяли и записывали в следующие 4 минуты.Количество пересечений было количеством крыс, пересекающих решетку (означает способность животных двигаться автономно). Число подъёмов было несколько раз для лап крыс, оторванных от земли (означает любопытство крыс к свежей окружающей среде). Время вне сети — это время от помещения крысы в ​​центральную решетку до выхода из центральной сети (означает способность животных адаптироваться к новой среде). Инфракрасная камера и видеосистема были применены для обнаружения индикаторов три раза, и данные были проанализированы с помощью системы анализа поведения (SLY-ETS, Beijing Shuo Lin Yuan Technology).OFT проводился на неделях 0, 1, 2, 3 и 4.

Тест принудительного плавания (FST)

Мы ссылались на FST в предыдущей литературе и немного изменили его (Gong et al., 2019). Мы поместили крысу в стеклянную бутылку высотой 100 см и диаметром 20 см соответственно. В стеклянную бутыль помещали воду при 25 ° C высотой 35 см. Весь эксперимент FST длился 5 минут, а затем время неподвижности последних 4 минут было записано с помощью программного обеспечения FST. Время неподвижности определяли, когда головы крыс плавали над водой в течение последних 4 мин и прекращали борьбу.Этот тест проводился на 4 неделе.

Определение уровней CRH, ACTH и CORT в сыворотке

Образцы сыворотки (хранящиеся при -80 ° C) центрифугировали при 5000 об / мин в течение 15 минут при 4 ° C. Уровни кортикотропин-высвобождающего гормона (CRH), адренергического гормона (ACTH) и кортикостерона (CORT) в сыворотке крови тестировали с помощью коммерческих наборов иммуноферментного иммуносорбента (ELISA) (Westang Bio-tech Co, Ltd., Шанхай, Китай). ).

Обнаружение уровней нейротрансмиттеров моноаминов

Уровни нейротрансмиттеров моноаминов в гиппокампе определяли с помощью LC-MS / MS-IT-TOF.Метод был следующим: 30 мг образца замороженной ткани гиппокампа удаляли и помещали в стеклянный гомогенизатор. Добавляли предварительно охлажденный 0,1 моль · л -1 раствор хлорной кислоты, содержащий 0,01% EDTA-2Na. Гомогенат помещали в пробирки ЕР объемом 1,5 мл и центрифугировали при 15000 об / мин -1 при 4 ° C в течение 20 минут, после чего супернатант удаляли. После фильтрации супернатанта фильтром 0,22 мкм моноаминовые нейромедиаторы, включая 5-гидрокситриптамин (5-HT), 5-гидроксииндолеуксусную кислоту (5-HIAA), дофамин (DA), глутаминовую кислоту (Glu), триптофан (Trp), тирозин ( Tyr), 3,4-дигидроксибензиламин бромистоводородная кислота (ГАМК) и норадреналин (NE) были обнаружены в ткани мозга на аппарате LS-MS / MS-IT-TOF.

В этом эксперименте использовалась колонка Agilent ZORBAX SB-C18 (T3, 2,1 × 100 мм × 1,8 мкм). В масс-спектрометре использовался источник ионизации электрораспылением (ESI), одновременное сканирование положительных и отрицательных ионов и режим мониторинга множественных реакций (MRM); напряжение впрыска источника составляло 5 500 В (-4 500 В), температура нагрева составляла 550 ° C, а соответствующее давление газа составляло 160 фунтов на квадратный дюйм. В качестве сорастворителя использовался полисорбат-80 (1 фунт / кв. Дюйм = 6,895 кПа), давление газа составляло 265 фунт / кв. Дюйм.

Приготовление образца сыворотки и

1 H-ЯМР-спектрометрия

Сыворотку сняли с хранилища при -80 ° C и разморозили в смеси со льдом и оставили при комнатной температуре.Затем 450 мкл сыворотки смешивали с 350 мкл D 2 O в 1,5 мл пробирке EP и центрифугировали в течение 20 минут при 13000 об / мин и 4 ° C. После этого 600 мкл супернатанта аспирировали и помещали в 5 мм-ЯМР-пробирку.

1 Н-ЯМР-спектрометрию сыворотки измеряли с помощью спектрометра Bruker 600-МГц (Bruker, Германия) при 25 ° C. Другие условия были следующими: адаптация последовательности импульсов CPMG (Carr-Purcell-Meiboom-Gill), спектр обнаружения 7149,2000 Гц, число сканирований 64.0000, разрешение FID 0,1880 Гц, время импульса 9,9500 с и точка выборки 32768,0000. Все спектры подвергали преобразованию Фурье 1 H-ЯМР в сыворотке с использованием программного обеспечения для обработки данных MestReNova ЯМР. Спектры были скорректированы на химические сдвиги с креатинином (δ 3,04 ppm) в качестве стандарта, а интервал δ 4,30 ~ 5,16 ppm был отсечкой для пиков воды. Спектр ЯМР δ 0,70 ~ 8,60 м.д. был разделен на равные ширины, сегментирован и интегрирован в единицах 0.01, до которого данные были нормализованы. Обработанные данные были сохранены в таблице Excel для многомерного статистического анализа.

После использования SIMCA-P14.1 для централизации и нормализации интегральных данных был использован метод частичных наименьших квадратов (PLS-DA) для сравнения групп и проверки модели; Метод ортогональных частных наименьших квадратов был использован для методов дискриминантного анализа (OPLS-DA). Сравнивались различия метаболитов между группами. SPSS 21.0 и GraphPad Prism 5 использовались для статистического анализа и построения графиков потенциальных биомаркеров.Для сравнения различий использовались односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) и t-тесты.

Статистический анализ

Значения из поведенческих данных показаны как среднее ± SEM. Тест t использовали для анализа статистических различий между двумя группами, а для анализа статистических различий между несколькими группами использовали односторонний дисперсионный анализ. Порог статистической значимости считался равным P <0,05 ( P <0,01). Статистический анализ был выполнен с помощью SPSS 21.0 программное обеспечение. Корреляционный анализ Пирсона был использован для оценки корреляций между моноаминовыми нейротрансмиттерами, гормонами оси HPA и дифференциальными метаболитами.

Результаты

Приготовление и определение CSE

Процесс экстракции и обогащения CSE из остатков инъекций сафлора был подробно описан в нашей предыдущей работе (Jin et al., 2018). В этом исследовании CSE был подготовлен трижды с помощью одного и того же процесса. Общее содержание четырех соединений кумароилспермидина в CSE, ( 1 ): N1, N5 и N10- ( Z ) -три-пара-кумароилспермидин, ( 2 ): N1, N5- ( Z ) -N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин, ( 3 ): N1- ( E ) -N5- ( Z ) -N10- ( E ) -tri-p -кумароилспермидин и ( 4 ): N1, N5, N10- ( E ) -три-п-кумароилспермидин измеряли и подсчитывали с помощью предыдущего метода.Общее содержание четырех соединений в CSE и выход показаны в таблице 1. На рис. 3 показана хроматограмма HPLC CSE. В каждом препарате общее содержание кумароилспермидина CSE составляло ~ 65%, а выход достигал 85%.

Таблица 1 Данные для получения CSE из остатков инъекции сафлора.

Фигура 3 ВЭЖХ-хроматограммы стандартов и CSE [λ = 280 нм, (A) стандарты кумароилспермидина, (B) CSE]. Compouds 1 4 представляет собой соответствующие четыре продукта кумароилспермидина.

Эффект CSE у крыс CUMS

Влияние CSE на массу тела крыс CUMS показано на рисунке 4A. Крысы в ​​каждой группе не показали значительной разницы в массе тела после 1 недели адаптации. После четырех недель процедур CUMS крысы в ​​группе Mod показали меньшую массу тела, чем в группе Con ( P <0,01). Крысы в ​​группах CSE-H и CSE-M показали тенденцию к увеличению массы тела по сравнению с группой Mod, но не имели значения. Это подсказало, что CSE может влиять на другие факторы, а не на прием пищи.

Рисунок 4 Влияние экстракта кумароилспермидинов (CSE) на массу тела крыс CUMS (A) , предпочтение сахарозы (B) , номер скрещивания (C) , номер выращивания (D) , время вне сети (E) и FST (F) . Приведены средние значения ± стандартная ошибка среднего (n = 10). ## P <0,01 по сравнению с контрольной группой. ** P <0,01, * P <0,05 по сравнению с модельной группой. (Con: контрольная группа, Mod: модельная группа, Ven: группа венлафаксина, CSE-H: высокая группа CSE, CSE-M: средняя группа CSE, CSE-L: низкая группа CSE).

SPT использовался для изучения эффектов CSE на крысах, перенесших процедуры CUMS (рис. 4B). Крысы, подвергшиеся 28-дневным стрессовым процедурам в группе Mod, показали более низкое предпочтение сахарозы, чем крысы, не подвергавшиеся стрессу Con, что подтверждает успешное внедрение модели CUMS ( P <0,01). Группа Ven (положительный контроль) показала значительно более высокое предпочтение сахарозы у крыс CUMS по сравнению с группой Mod (85,07%, P <0,01). Точно так же профилактическое пероральное введение CSE привело к восстановлению предпочтения сахарозы до нормального уровня у крыс CUMS в группе CSE-M (84.86%, P <0,01) и группа CSE-H (73,61%, P <0,01). Эффекты восстановления предпочтения сахарозы для CSE-M и CSE-H составили 99,75% и 86,53% в группе Ven, соответственно. Группа CSE-L имела тенденцию к возврату к предпочтению сахарозы у крыс CUMS, хотя это не было значимым по сравнению с группой Mod (63,62%, P = 0,135).

Влияние CSE на количество скрещиваний и выращивания у крыс CUMS исследовали с использованием OFT (рисунки 4C, D).После 4 недель воздействия CUMS в группе Mod было меньше скрещиваний и вставок крыс, чем в группе Con. Лечение Ven увеличило количество переходов и вставок по сравнению с группой Mod ( P <0,01). Ежедневное пероральное введение CSE-M показало значительный эффект на увеличение числа пересечений и вставок по сравнению с группой Mod ( P <0,05). Эффект увеличения для CSE-M составил 85,60% и 86,37% для группы Ven. Время выхода из центральной сетки было одним из показателей OFT, который указывает на любопытство животных и их приспособляемость к новой среде, схожую со страхом пациентов с депрессией перед странной средой.По сравнению с группой Con, группа Mod проводила больше времени вне сети после 28-дневных процедур CUMS (рис. 4E). Время выхода из центральной сетки было значительно меньше в группе Ven. Хроническое пероральное введение CSE-M значительно сокращало время пребывания в центральной решетке у крыс CUMS. Другими словами, средняя доза CSE может улучшить приспособляемость депрессивно-подобных крыс к чужой среде. В то время как группы CSE-H и CSE-L имели тенденцию к меньшему времени, проведенному в центральной сетке, что было относительно группы Ven без статистической разницы.

FST использовался для исследования влияния CSE на время неподвижности у крыс CUMS (рис. 4F). После 4-недельного режима CUMS время неподвижности в группе Mod было больше, чем в группе Con. Было обнаружено, что профилактическое введение CSE сокращает время неподвижности у крыс CUMS по сравнению с группой Mod ( P <0,01). Группа CSE-M показала наиболее очевидный эффект, а время неподвижности было ниже, чем в группе Mod ( P <0,01), которая достигла 93,03% в группе Ven.

CSE регулирует уровни гормонов, связанных с осью HPA, у крыс с CUMS

Уровни гормонов CRH, ACTH и CORT в сыворотке крови крыс, связанных с осью HPA, оценивали с помощью ELISA. Как показано на рисунке 5, сывороточные уровни CRH, ACTH и CORT в группе Mod были значительно выше, чем в группе Con ( P <0,01). Уровни экспрессии CRH были заметно ниже в группах, получавших лекарственное средство, по сравнению с группой Mod ( P <0,01). После перорального введения CSE во всех группах наблюдалось значительное снижение уровней CRH по сравнению с группой Mod ( P <0.01). Экспрессия АКТГ была значительно снижена у крыс CUMS по сравнению с таковыми в группе Mod. Все дозовые группы CSE могут значительно улучшить сниженный уровень АКТГ. По сравнению с группой Con крысы, получавшие хроническое 28-дневное лечение CUMS, показали значительно повышенные уровни CORT у крыс CUMS, а крысы, получавшие антидепрессанты в группе Ven, показали значительные изменения в увеличении уровней CORT. Подводя итог, можно сказать, что CSE может улучшить расстройство оси HPA у депрессивно-подобных крыс.

Рисунок 5 Влияние CSE на ось HPA крыс CUMS. (A) Кортикотропин-высвобождающий гормон (CRH), (B) Адренокортикотропный гормон (ACTH), (C) Кортикостерон (CORT). Приведены средние значения ± стандартная ошибка среднего (n = 10). ## P <0,01 по сравнению с контрольной группой. ** P <0,01 по сравнению с модельной группой.

Эффект CSE на нейротрансмиттеры в гиппокампе крыс CUMS

Эффекты CSE на уровни нейротрансмиттеров моноаминов Trp, 5-HT и 5-HIAA в гиппокампе крыс CUMS были исследованы и показаны на рисунках 6A – C.Уровни Trp в гиппокампе были значительно ниже в группе Mod, чем в группе Con. Группа Ven (положительный контроль) показала значительно более высокие уровни Trp, чем группа Mod. Пероральное введение CSE-M в течение 28 дней значительно изменило снижение содержания Trp в гиппокампе по сравнению с группой Mod ( P <0,01). Уровни 5-HT в гиппокампе были значительно ниже в группе Mod, чем в группе Con, после 4 недель процедур CUMS. Значительное увеличение уровней 5-HT в гиппокампе наблюдалось после хронического перорального приема CSE-H и CSE-M по сравнению с группой Mod ( P <0.01). После 4 недель перорального введения CSE-H и CSE-L уровни 5-HIAA в гиппокампе были увеличены у крыс CUMS по сравнению с группой Mod ( P <0,05).

Рисунок 6 Концентрации CSE на моноаминовом нейротрансмиттере в гиппокампе крыс, (A) Trp, (B) 5-HT, (C) 5-HIAA, (D) Tyr, (E) DA, (F) NE, (G) GABA и (H) Glu. Приведены средние значения ± стандартная ошибка среднего (n = 10). ## P <0,01, # P <0,05 по сравнению с контрольной группой. ** P <0,01, * P <0,05 по сравнению с модельной группой.

Эффекты CSE на уровни нейротрансмиттеров в метаболическом пути NE в гиппокампе крыс CUMS также были исследованы и показаны на рисунках 6D – F. Уровни Try были значительно ниже в группе Mod, чем в группе Con, и показали значительное повышение после 28 дней введения CSE-H или CSE-M ( P <0.05). Уровни DA в группе Mod, которые подвергались процедурам CUMS в течение 4 недель, были значительно ниже, чем в группе Con. По сравнению с группой Mod ежедневное пероральное введение CSE-M и CSE-H значительно изменяло концентрации DA у крыс CUMS ( P <0,05). Длительное введение CSE привело к значительному увеличению концентрации NE у крыс CUMS по сравнению с группой Mod.

Уровни ГАМК и Glu были значительно снижены у крыс CUMS по сравнению с таковыми в группе Con (Рисунки 6G, H).После хронического перорального введения CSE-M и CSE-H уровни ГАМК и Glu были выше, чем в группе Mod ( P <0,05).

CSE измененные метаболические профили у крыс CUMS

Идентификация водных метаболитов сыворотки

Сыворотка каждой группы крыс собиралась и тестировалась на спектр 1 H-ЯМР. Фиг. 7 представляет собой типичный спектр 1 H-ЯМР сывороточных метаболитов контрольной группы. По сравнению с базой данных в сыворотке контрольной группы было идентифицировано всего 24 метаболита, включая аминокислоты, липиды, холин и углеводы.Подробная информация о метаболитах представлена ​​в таблице 2.

Рисунок 7 1 H-ЯМР-спектры сыворотки, полученной из контрольной группы. (1) липид, (2) лейцин, (3) валин, (4) изолейцин, (5) β-гидроксимасляная кислота, (6) молочная кислота, (7) аланин, (8) ацетат, (9) N-ацетилгликопротеин , (10) O-ацетилгликопротеин, (11) ацетоацетат, (12) глутаминовая кислота, (13) пируват, (14) глутамин, (15) диметиламин, (16) холин, (17) фосфатидилхолин, (18) оксид триметиламина, (19) креатин, (20) глицерин, (21) α-глюкоза, (22) тирозин, (23) гистидин и (24) формиат.

Таблица 2 1 Определение H-ЯМР основных метаболитов в сыворотке крови крыс.

Влияние CSE на сыворотку крыс CUMS и анализ потенциальных метаболитов

Для получения потенциальных метаболитов сначала был использован контролируемый метод PLS-DA для анализа сыворотки. 1 Данные H-ЯМР группы Con. Группа модов и группа CSE-M (рис. 8A). Каждая точка представляла отдельный образец, и кластеры, соответствующие метаболическим паттернам различных групп, были показаны на графике оценок.На рисунке 8A модельная группа и контрольная группа четко разделены, что указывает на то, что модель CUMS успешно построена, и разница в метаболитах между этими двумя группами значительна. Группа CSE-M была расположена между группой Mod и группой Con на Фигуре 8A, что дополнительно указывает на то, что CSE может регулировать метаболическое нарушение, вызванное CUMS. Тест перестановки R2 и Q2 показал валидацию модели PLS-DA (рисунок 8B). R2Y составляло 0,983, R2X составляло 0,983, а Q2 составляло 0,562. Эти данные показали, что модель исправна и переобучения нет.

Затем был использован метод OPLS-DA для идентификации дифференциальных метаболитов между группой Mod и группой Con. Как показано на рисунке 8C, модельная группа четко отделена от контрольной группы на графиках OPLS-DA, что дополнительно указывает на то, что модель была успешно создана. Между тем, значения VIP S-графиков (> 1,0) и T-тестов (p <0,05) использовались для скрининга существенно различающихся метаболитов. Как показано на рисунке 9, семь потенциальных метаболитов (ацетат, O-ацетил-гликопротеин, триметиламин, креатин, холин, аланин и глутаминовая кислота) у крыс Mod были значительно снижены по сравнению с группой Con, а три потенциальных метаболита (изолейцин, лактат , и N-ацетил-гликопротеин) были увеличены.Важно отметить, что CSE-M может регулировать эти 10 потенциальных метаболитов близко к контрольному уровню (рис. 9), что показывает, что CSE обладает хорошим антидепрессивным действием.

Рисунок 9 Сравнение относительных площадей пиков потенциальных метаболитов в 1H-ЯМР, связанных с обработкой CSE в сыворотке. Данные представлены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего (n = 6). ## P <0,01, # P <0,05 по сравнению с контрольной группой. ** P <0,01, * P <0,05 по сравнению с модельной группой.Десятью метаболитами были: (A-J), ацетат, O-ацетил-гликопротеин, оксид триметиламина, изолейцин, креатин, холин, алалин, глутаминовая кислота, лактат, N-ацетил-гликопротеин.

Анализ метаболических путей

Анализ метаболических путей может не только получить информацию о биологии метаболитов при болезни, но также предоставить важную информацию для патофизиологии болезни. Возможные метаболические пути депрессии были получены после импорта десяти потенциальных эндогенных биомаркеров в MetaboAnalyst.Анализ путей метаболитов, на которые влияет CSE, представлен на фиг. 10. При значении воздействия> 0,1 эти пути считались наиболее релевантными, связанными с индуцированным CUMS депрессивным поведением у крыс. Четыре пути: (1) метаболизм D-глутамина и D-глутамата, (2) метаболизм аланина, аспартата и глутамата, (3) биосинтез аргинина и (4) метаболизм аргинина и пролина, были идентифицированы как наиболее эффективные метаболические пути, связанные с CUMS (рисунок 10). Этот анализ путей показывает, что антидепрессивный эффект CSE на крыс CUMS может быть связан с этими четырьмя путями.

Рисунок 10 Анализ пути метаболитов сыворотки, на которые влияет CSE.

Корреляция между моноаминовыми нейротрансмиттерами и гормонами оси HPA и дифференциальными метаболитами

Мы исследуем функциональную взаимосвязь между измененными нейротрансмиттерами моноаминов, гормонами оси HPA и дифференциальными метаболитами, используя коэффициенты корреляции Пирсона (Li et al., 2018). Коэффициенты продемонстрировали, что 5-HT отрицательно коррелировал с изолейцином, тогда как гормоны оси HPA положительно коррелировали с изолейцином (фигура 11).Кроме того, глутаминовая кислота положительно коррелировала с Trp, 5-HT и DA. Оксид триметиламина, АКТГ и CRH показали отрицательную корреляцию, тогда как 5-HT, Trp и DA показали положительную корреляцию. Уровни аминокислот с разветвленной цепью (BCAA), таких как изолейцин, были значительно снижены в сыворотке крыс CUMS, что указывает на затрудненное высвобождение 5-HT в головном мозге (Blomstrand, 2006; Noh et al., 2006). Кроме того, мы обнаружили, что уровни изолейцина и 5-HT вернулись к норме после лечения CSE.

Рис. 11 Тепловая карта, обобщающая корреляцию Пирсона между моноаминовым нейромедиатором, гормонами оси HPA и дифференциальными метаболитами. (* P <0,05, ** P <0,01).

Обсуждение

В этом исследовании мы обнаружили, что предпочтение сахарозы у крыс CUMS в группах CSE-M и CSE-H может значительно увеличиваться ( P <0,01), но только CSE-M продемонстрировал значительное влияние на эксперимент в открытом поле ( P <0.05) и тесты принудительного плавания ( P <0,01) крыс CUMS. Этот результат показал, что различные компоненты с различным содержанием в CSE по-разному влияют на депрессивное поведение крыс CUMS. Таким образом, необходимо провести качественный и количественный химический анализ CSE и более экспериментальную проверку антидепрессивного эффекта.

Повышенная активность HPA — одна из распространенных нейробиологических аномалий у пациентов с депрессией. CRH высвобождается из паравентрикулярного ядра гипоталамуса и усиливает высвобождение гипофизарного АКТГ во время стресса.Впоследствии этот гормон усиливает секрецию глюкокортикоидов корой надпочечников. Согласно этой интерпретации, было замечено, что стрессовые крысы имели более высокие уровни CRH, ACTH и CORT. Однако лечение КСЭ и венлафаксином могло изменить эти показатели, указывая на улучшение нейроэндокринной системы. Кроме того, моноаминергические нейроны гиппокампа могут быть повреждены из-за повышенной активности оси HPA, что приводит к снижению моноаминов (Zhang et al., 2019). После приема CSE и венлафаксина уровни 5-HT, DA, GABA и NE восстановились.Моноамины являются ключевыми нейромодуляторами в развитии расстройств настроения. Исследования показали, что уровень моноаминов в областях мозга (например, в префронтальной коре и гиппокампе) можно повысить за счет приема антидепрессантов (Blier, 2016). Это показывает, что антидепрессивный эффект CSE может быть связан с регуляцией моноаминергической системы.

Глутамат — один из основных эндогенных нейротрансмиттеров возбуждения, играющий важную роль в центральной нервной системе. Нарушение глутаматного цикла тесно связано с возникновением и развитием депрессии.В этом исследовании, по сравнению с группой Con, уровень глутамина в группе Mod был значительно снижен. Причина может быть связана с ингибированием цикла TCA или обращением переносчиков глутамата и нарушенным циклом глутамат-глутамин (Liu et al., 2019). Однако эта тенденция к снижению восстановилась после приема CSE. Предполагается, что метаболические пути глутамина и D-глутамата могут играть важную роль в антидепрессивном эффекте CSE.

Хотя в структуре основных компонентов в CSE имеется на три кумароильных группы больше, чем в спермидине, эти три заместителя легко разлагаются до спермидина in vivo .Спермидин — это богатый природный полиамин, присутствующий во всех организмах, включая многие травы, используемые в традиционной китайской медицине ( Lycium barbarum , Astragalus propinquus и т. Д.). Спермидин часто входит в наш ежедневный рацион, а добавление спермидина в рацион может увеличить продолжительность жизни и продолжительность здоровья (Eisenberg et al., 2016; Yue et al., 2017; Madeo et al., 2018). В моделях на животных он обладает значительным кардиозащитным и нейропротекторным действием, улучшает снижение метаболизма, связанное со старением, и стимулирует противоопухолевый иммунный надзор.Аутофагия играет важную роль в функции спермидина для здоровья (Madeo et al., 2018). После приема спермидина aPWV (скорость аортальной пульсовой волны) у пожилых мышей стала нормальной, и NO-опосредованная эндотелиально-зависимая релаксация была восстановлена. Считается, что этот эффект спермидина связан с аутофагией (LaRocca et al., 2013). Спермидин также предотвращает токсичность экспрессии трансгенного α-синуклеина у мух и нематод (Buettner et al., 2014), что согласуется с идеей о том, что (усиленная спермидином) аутофагия очищает агрегаты сполюбиквитин-ассоциированного и другого нейротоксичного белка.Аутофагия — это зависимый от лизосом путь расщепления белка, который поддерживает гомеостаз клеточной среды за счет деградации и повторного использования поврежденных органелл и белков долголетия. Он работает с протеасомной системой убиквитина для поддержания нормального метаболизма. По-прежнему существует много споров о том, что аутофагия демонстрирует положительный или отрицательный регуляторный эффект на неврологические заболевания (Son et al., 2012), но некоторые экспериментальные результаты на животных предполагают, что антидепрессивный эффект некоторых антидепрессантов может быть связан с его повышающей регуляцией. клеточная аутофагия.Антидепрессанты амитриптилин и циталопрам повышают уровень астроцитов и нейронов крыс на аутофагии (Zschocke et al., 2011). Кетамин не проявлял антидепрессивного эффекта у мышей с нокаутом FKBP51, но экспрессия маркеров аутофагии (таких как Beclin-1) у мышей дикого типа повышалась после лечения кетамином, тогда как Beclin-1 не регулировался у мышей с нокаутом FKBP51 ( Гассен и др., 2014). Кроме того, исследования показывают, что аутофагия способствует развитию синапсов у Drosophila (Shen and Ganetzky, 2009).

Спермидин также ингибирует провоспалительные цитокины и улучшает биодоступность аргинина, который необходим для биосинтеза оксида азота (NO). В LPS-стимулированных макрофагах RAW 264.7 спермидин значительно ослаблял LPS-индуцированную продукцию NO и PGE2, подавляя экспрессию iNOS и COX-2 как на уровне белка, так и на уровне мРНК без цитотоксичности (Jeong et al., 2018). В модели крыс с индуцированной ротеноном болезнью Паркинсона не только уровни IL-6, IL-1β и TNF-α в полосатом теле были улучшены, но и уровень ГАМК, DA, NE и 5-HT значительно повышался при лечении. со спермидином по сравнению с модельной группой (Sharma et al., 2018). Результаты нашего исследования также показывают, что 28-дневное введение CSE может восстановить тенденцию к снижению этих нейромедиаторов, вызванную CUMS. Все больше данных свидетельствует о том, что воспалительные реакции участвуют в патофизиологии депрессии (Hashimoto, 2015; Mechawar and Savitz, 2016; Miller et al., 2017). Мета-анализ показал, что уровни провоспалительных цитокинов интерферона-γ, IL-2, IL-6 и TNF-α в крови нелеченных или леченных лекарствами пациентов с депрессией повышены по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы (Köhler et al. ., 2018). Многие селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (СИОЗС), такие как эсциталопрам, могут значительно блокировать вызванное ЛПС повышение уровней провоспалительного цитокина TNF-α в сыворотке крови и повышать уровни IL-10, оказывая антидепрессивный эффект (Dong et al., 2016).

Тем не менее, спермидин является богатым природным полиамином, присутствующим в нашей пище, который может продлевать здоровье и продолжительность жизни несколькими способами. И это первый раз, когда сообщается об экстракте травы (CSE) из остатков сафлора, демонстрирующем антидепрессивный эффект в модели CUMS.Аутофагия и противовоспалительное действие могут быть основными механизмами CSE.

Заключение

Сафлоровые инъекции одобрены для лечения сердечно-сосудистых заболеваний в Китае. Однако в процессе производства образуется большое количество остатков лекарственного средства из-за процесса водной экстракции и осаждения спирта. В этом исследовании общий экстракт кумароилспермидина (CSE), включающий четыре соединения кумароилспермидина, был впервые приготовлен из остатков инъекций сафлора.Общее содержание кумароилспермидина в CSE составило 64,86 ± 0,41%. CSE демонстрирует значительный антидепрессивный эффект в модели CUMS, который, вероятно, связан с регуляцией оси HPA, моноаминовых нейромедиаторов и метаболизма D-глутамина и D-глутамата. Это исследование не только подготовило экстракт остатков травы с антидепрессивным действием, но также предоставило способ эффективного использования остатков сафлора. И ясный механизм антидепрессивного эффекта CSE и возможные побочные эффекты еще предстоит изучить в подходящих экспериментальных условиях.

Заявление о доступности данных

Все наборы данных, созданные для этого исследования, включены в статью / Дополнительные материалы.

Вклад авторов

JT и TL разработали и выполнили эксперименты. TL выполнил все эксперименты, в том числе написал статью и проанализировал данные. YJ добился отделения CSE. SL был ответственным за дизайн всего эксперимента и написал статью. LZ и XQ уловили общую идею и дали техническое руководство. Все авторы участвуют в обсуждении результатов и модификации статьи.

Финансирование

Этот документ был поддержан в рамках проекта ключевых исследований и разработок провинции Шаньси (201603D3113008, 2016ZD0504, 201903D321210 и 201803D31031). Проект стандарта для TCM (ZYBZH-C-JIN-44) и Национального фонда естественных наук Китая (31800293). Мы благодарим инструментальный центр Университета Шаньси за сервис.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphar.2020.00713/full#supplementary-material

Ссылки

Ao, H. , Фэн, В., Пэн, К. (2018). Hydroxysafflor yellow A: перспективное лечебное средство при широком спектре заболеваний. Доказано. Компл. Альт. 2018, 1–17. DOI: 10.1155 / 2018/8259280. Идентификатор статьи: 8259280.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Buettner, S., Broeskamp, ​​F., Sommer, C., Markaki, M., Habernig, L., Alavian-Ghavanini, A., et al. (2014). Спермидин защищает от нейротоксичности α-синуклеина. Cell Cycle 13, 3903–3908. doi: 10.4161 / 15384101.2014.973309

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Dong, C., Zhang, J. C., Yao, W., Ren, Q., Yang, C., Ma, M., et al. (2016). Влияние эсциталопрама, R-циталопрама и ребоксетина на сывороточные уровни фактора некроза опухоли альфа, интерлейкина-10 и депрессивное поведение мышей после введения липополисахаридов. Pharmacol. Biochem. Behav. 144, 7–12. doi: 10.1093 / ijnp / pyw089

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Eisenberg, T., Knauer, H., Schauer, A., Büttner, S., Ruckenstuhl, C., CarmonaGutierrez, D., et al. (2009). Индукция аутофагии спермидином способствует долголетию. Нат. Cell Biol. 11, 1305–1314. doi: 10.1038 / ncb1975

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Eisenberg, T., Abdellatif, M., Schroeder, S., Primessnig, U., Stekovic, S., Pendl, T., et al. (2016). Кардиопротекция и увеличение продолжительности жизни за счет натурального полиамина спермидина. Нат. Med. 22, 1428–1438. DOI: 10.1038 / nm.4222

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gassen, N.C., Zschocke, J., Hafner, K., Zellner, A., Kollmannsberger, L., Uhr, M., et al. (2014). Связь FKBP51 с праймингом путей аутофагии и опосредованием ответа на лечение антидепрессантами: данные на клетках, мышах и людях. PloS Med. 11, e1001755. doi: 10.1371 / journal.pmed.1001755

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gong, W., Zhu, S., Chen, C., Yin, Q., Li, X., Du, G. (2019). Антидепрессивный эффект Angelicae Sinensis radix связан с фармакологической активностью по модуляции гематологических аномалий. Фронт. Pharmacol. 10, 192. doi: 10.3389 / fphar.2019.00192

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хашимото, К.(2015). Воспалительные биомаркеры как дифференциальные предикторы антидепрессивного ответа. Внутр. J. Mol. Sci. 16, 7796–7801. DOI: 10.3390 / ijms 16047796

PubMed Аннотация | Google Scholar

Jeong, J. W., Cha, H. J., Han, M. H., Hwang, S. J., Lee, D. S., Yoo, J. S., et al. (2018). Спермидин защищает от окислительного стресса в моделях воспаления с использованием макрофагов и рыбок данио. Biomol. Ther. 26, 146–156. doi: 10.4062 / biomolther.2016.272

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jin, Y., Ли, С., Чжан, Л. (2018). Изучение процесса экстракции и определение содержания спермидинов в осадках для инъекций сафлора. Chem. Res. Прил. 30, 1239–1245. doi: 10.3969 / j.issn.1004-1656.2018.08.006

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йока, С. Р., Мориан, Ф. А., Вегенер, Г. (2015). Атипичные нейротрансмиттеры и нейробиология депрессии. CNS Neurol. Disord-DR. 14, 1001–1011. doi: 10.2174 / 1871527314666150

4804

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Köhler, C.A., Freitas, T.H., Stubbs, B., Maes, M., Solmi, M., Veronese, N., et al. (2018). Периферические изменения уровней цитокинов и хемокинов после лечения антидепрессантами при большом депрессивном расстройстве: систематический обзор и метаанализ. Мол. Neurobiol. 55, 4195–4206. doi: 10.1007 / s12035-017-0632-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

LaRocca, T. J., Gioscia-Ryan, R.A., Hearon, C. M. J., Seals, D. R. (2013). Спермидин, усиливающий аутофагию, обращает вспять старение артерий. мех. Aging Dev. 134, 314–320. doi: 10.1016 / j.mad.2013.04.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, С., Юань, М., Чжан, Л. (2016). Одновременное определение четырех составляющих кумароилспермидина в Carthamus tinctorius с помощью HPLC-DAD. Чжунго Чжун Яо За Чжи 41, 1480–1484. doi: 10.4268 / cjcmm20160819

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Li, Y., Peng, Y., Ma, P., Ян, Х., Сюн, Х., Ван, М. (2018). Эффекты экстракта Cistanche tubulosa , подобные антидепрессантам, на крыс с хроническим непредсказуемым стрессом за счет восстановления гомеостаза кишечной микробиоты. Фронт. Pharmacol. 9, 967. doi: 10.3389 / fphar.2018.00967

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лю, М. Х., Ван, З. Ю., Чен, Л., Лю, Г. К., Чжэн, Х. (2016). Применение скорлупы арахиса и смеси биоугля китайской медицины в качестве добавки к почве, загрязненной свинцом. Период. Ocean Univ. Китай. 46, 101–107. doi: 10.16441 / j.cnki.hdxb.20150035

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Liu, X, Zheng, X, Du, G, Li, Z, Qin, X (2019). Исследование метаболизма мозга антидепрессантоподобного эффекта Xiaoyaosan на крыс с CUMS-депрессией с помощью анализа 1H ЯМР. J. Ethnopharmacol. 235, 141–154. doi: 10.1016 / j.jep.2019.01.018

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ma, J., Chen, Y., Zhao, Y., Чен, Д., Ван, Х. (2019). Влияние остатков традиционной китайской медицины на рост растений и свойства почвы: тематическое исследование с кукурузой ( Zea mays L .). Environ. Sci. Загрязнение. R. 26, 32880–32890. doi: 10.1016 / j.still.2019.104386

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мадео, Ф., Айзенберг, Т., Пьетрокола, Ф., Кремер, Г. (2018). Спермидин в здоровье и болезни. Science 359, 410. doi: 10.1126 / science.aan2788

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миллер, А.Х., Харун, Э., Фельгер, Дж. К. (2017). Терапевтические последствия мозговых иммунных взаимодействий: лечение в переводе. Neuropsychopharmacol. 42, 334–359. doi: 10.1038 / npp.2016.167

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Но, Х. С., Хах, Ю. С., Нилуфар, Р., Хан, Дж., Бонг, Дж. Х., Канг, С. С. (2006). Ацетоацетат защищает нервные клетки от окислительной токсичности глутамата. J. Neurosci. Res. 83, 702–709. doi: 10.1002 / jnr.20736

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sharma, S., Кумар, П., Дешмук, Р. (2018). Нейропротекторный потенциал спермидина против индуцированной ротеноном болезни Паркинсона у крыс. Neurochem. Int. 116, 104–111. doi: 10.1016 / j.neuint.2018.02.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сон, Дж. Х., Шим, Дж. Х., Ким, К. Х., Ха, Дж. Й., Хан, Дж. Й. (2012). Нейрональная аутофагия и нейродегенеративные заболевания. Exp. Мол. Med. 44, 89–98. doi: 10.3858 / emm.2012.44.2.031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тиан, Дж., Ши, Б., Сян, Х., Гао, С., Цинь, X. (2013). Ду, Г. 1 Метабономические исследования на основе H-ЯМР антидепрессивного действия генипина на модели крыс с хроническим непредсказуемым легким стрессом. PloS One 8, e75721. doi: 10.1371 / journal.pone.0075721

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тиан, Дж., Лю, К., Сян, Х., Чжэн, X., Пэн, Г., Чжан, X. (2015). Исследование антидепрессивного действия масла семян облепихи с помощью метаболомики на основе ГХ-МС в сочетании с многомерным анализом. Food Funct. 6, 3585. doi: 10.1039 / c5fo00695c

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tian, ​​X., Yang, T., He, J., Chu, Q., Jia, X., Huang, J. (2017). Грибное сообщество и гены, разрушающие целлюлозу, в процессе компостирования остатков китайских лекарственных трав. Биоресурсы. Technol. 241, 374–383. doi: 10.1016 / j.biortech.2017.05.116

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wang, H., Feng, F. (2009).Идентификация компонентов отвара Zhi-Zi-Da-Huang с помощью ВЭЖХ в сочетании с тандемной масс-спектрометрией с ионизацией электрораспылением, матрицей фотодиодов и детекторами флуоресценции. J. Pharm. Биомед. Анальный. 49, 1157–1165. doi: 10.1016 / j.jpba.2009.02.023

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, К., Ли, С., Чжао, Ю., Ли, Х., Чжан, Л. В. (2018). Антикоагулянтная активность in vitro и активные компоненты Safflower Injection. Молекулы 23, 170. doi: 10.3390 / молекулы23010170

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Юань, М., Ли, С., Чжан, Л. (2015). Выделение и очистка кумароилспермидинов из Carthamus tinctorius L . и их эффекты ингибирования на обратный захват [ 3 H] -5-HT. J. Shanxi Med. Univ. 46, 442–447. doi: 10.13753 / j.issn.1007-6611.2015.05.014

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yue, F., Li, W., Zou, J., Jiang, X., Xu, G., Huang, H., et al. (2017).Спермидин продлевает продолжительность жизни и предотвращает фиброз печени и гепатоцеллюлярную карциному за счет активации MAP1S-опосредованной аутофагии. Cancer Res. 77, 2938–2951. doi: 10.1158 / 0008-5472

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, L., Gu, J., Wang, X., Sun, W., Yin, Y., Sun, Y., et al. (2017). Поведение генов устойчивости к антибиотикам при совместном компостировании свиного навоза с остатками китайских лекарственных трав. Биоресурсы. Technol. 244, 252–260.doi: 10.1016 / j.biortech.2017.07.035

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, L. L., Yang, Z. Y., Fan, G., Ren, J. N., Yin, K. J., Pan, S. Y. (2019). Эффект антидепрессанта Citrus sinensis (L.) Osbeck эфирного масла и его основного компонента лимонена на мышей. J. Agric. Food Chem. 67, 13817–13828. doi: 10.1021 / acs.jafc.9b00650

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhou, Y., Selvam, A., Вонг, Дж. В. К. (2014). Оценка гуминовых веществ при совместном компостировании пищевых отходов, опилок и остатков китайских лекарственных трав. Биоресурсы. Technol. 168, 229–234. doi: 10.1016 / j.biortech.2014.05.070

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhou, Y., Selvam, A., Wong, J. W. C. (2018). Остатки китайских лекарственных трав в качестве наполнителя для компостирования пищевых отходов. Биоресурсы. Technol. 249, 182–188. DOI: 10.1016 / j.biortech.2017.09.212

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zschocke, J., Zimmermann, N., Berning, B., Ganal, V., Holsboer, F., Rein, T. (2011). Антидепрессанты по-разному влияют на пути аутофагии в астроцитах и ​​нейроны, нарушая гомеостаз холестерина. Neuropsychopharmacol. 36, 1754–1768. doi: 10.1038 / npp.2011.57

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Влияние 20-гидроксиэкдизона, экстрактов Leuzea carthamoides, дексаметазона и их комбинаций на активацию NF-κB в клетках HeLa | Журнал фармации и фармакологии

Аннотация

Objectives

Растительный стероид 20-гидроксиэкдистерон (20E) и 20E-содержащие экстракты из Leuzea carthamoides (Willd.) DC продаются с заявлением об анаболическом и иммуномодулирующем воздействии. Тем не менее, их влияние на активацию ядерного фактора каппа B (NF- κ B), ключевого игрока в иммунном ответе и судьбе клеток, и их влияние на ингибирующую активность стероидных противовоспалительных препаратов NF- κ B. пока неизвестно.

Методы

Способность 20E, экстрактов левзеи и выбранных стероидных / нестероидных противовоспалительных препаратов влиять на активацию NF- κ B была исследована с использованием в качестве экспериментальной модели рака шейки матки человека HeLa-IL- 6 клеток, стабильно трансфицированных репортерным геном, связанным с IL-6.Влияние на жизнеспособность и пролиферацию клеток отслеживали (анализ МТТ). HPLC-DAD использовался для установления связи между химическими структурами экстрактов левзеи и их биоактивностью.

Основные выводы

20E ингибировал активацию NF- κ B (IC50 31,8 мкм), но был менее активен, чем другие метаболиты растений (ксантогумол 3,8 мкм, с ферином A 1,4 мкм). Экстракты левзеи с высоким содержанием 20E имели удовлетворительный активирующий эффект, но, напротив, некоторые экстракты с низким содержанием 20E значительно ингибировали активацию NF- κ B при IC50 в диапазоне от 3.От 5 до 6,2 мкг / мл. Комбинированные тесты подтвердили, что 20E не объясняет модуляцию NF- κ B, достигаемую экстрактами левзеи. Экстракты, но не сам 20E, показали значительную модуляцию ингибирующего действия дексаметазона NF- κ B.

Выводы

20E вряд ли является основным игроком в ингибирующих эффектах NF- κ B, проявляемых некоторыми экстрактами левзеи in vitro . В случае подтверждения in vivo следует проявлять осторожность в отношении продаваемых экстрактов левзеи, которые не стандартизированы или стандартизированы только для 20E, поскольку различные исходные материалы и экстракты могут даже вызывать противоположные эффекты.Что еще более важно, наши результаты указывают на потенциал взаимодействия левзеи со стероидными противовоспалительными препаратами.

Введение

Фитоэкдистероиды — это гидроксилированные стероиды растительного происхождения, многие из которых связаны с активностью гормона линьки насекомых. 20-гидроксиэкдистерон (20E, рис. 1) является основным представителем этой химической группы и широко распространен в царстве растений. Фитоэкдистероиды привлекли — с момента их открытия в 1960-х годах — большой научный интерес из-за их инсектицидной активности, экологической роли и потенциального применения в защите растений.Совсем недавно было предложено использование фитоэкдистероидов для животных и людей на основании их предполагаемого вмешательства в стероидные метаболические пути млекопитающих. [1] Хотя основное внимание по-прежнему уделяется эстрогенным и анаболическим эффектам, мало опубликовано об иммуномодулирующем и противовоспалительном потенциале этих соединений. [2–5] Кроме того, в зависимости от использованных тестовых моделей были получены противоречивые результаты. Тренин и Володин [6] описали 20E как модулятор лимфоцитов и нейтрофилов человека, а Tanaguchi et al . [7] и Harmatha и др. . [8] не обнаружил противовоспалительного действия 20E у крыс и изолированных макрофагов мышей, соответственно.

Рисунок 1

20-гидроксиэкдизон (20E).

Рисунок 1

20-гидроксиэкдизон (20E).

20E является основным фитоэкдистероидом в Leuzea carthamoides (Willd.) DC. (син. Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin, Asteraceae ). Основываясь на традиционном использовании левзеи, научные данные собирались с начала 1960-х годов в Советском Союзе, а затем в 1980-х годах в странах Восточной Европы, прежде чем впоследствии вызвали интерес во всем мире. [9–11] В результате были описаны различные эффекты для L. carthamoides , включая анаболические, [12,13] цитотоксические, противораковые, антиметастатические, [14,15] тонические / адаптогенные [16–18] и иммуномодулирующие свойства. [19,20] Его лекарственные применения были заменены его использованием в качестве анаболического «функционального» корма и пищевой добавки. Продукты обычно основаны либо на сухом порошкообразном корне, либо на его гидроэтанольных экстрактах, и предлагаются через Интернет в качестве естественной альтернативы спорному использованию стероидов в животноводстве, а также для употребления в пищу людьми с анаболическими свойствами. [5] Многие из этих продуктов, которые, как утверждается, обладают иммуноукрепляющими свойствами вместе с анаболическим действием, не раскрывают вид, часть растения или тип используемой экстракции. Это может создавать риски, например, для пациентов, страдающих хроническими иммунными состояниями, которые могут испытывать соблазн комбинировать такие продукты со своей текущей терапией на основе стероидов без медицинского наблюдения. Интересно, что утверждается, что препараты цельного растения, в основном традиционный гидроэтанольный экстракт корня, а также препараты из надземных частей, предпочтительнее очищенных составов 20Е, которые также доступны. [21]

Ядерный фактор каппа B (NF- κ B) играет центральную роль в клеточном иммунном ответе, воспалении и судьбе клеток, а на его активацию влияют глюкокортикоиды. [22] Экдистероиды, такие как муристерон A, взаимодействуют с системой NF- κ B, демонстрируя эффекты, сравнимые с дексаметазоном и ретиноевой кислотой, что приводит к передаче сигналов апоптоза в клетках мышиной лимфомы WEHI-231. [23] Экдистероиды эргостанового типа из Polyporus umbellatus проявили сильную противовоспалительную активность в тесте на ТРА-индуцированное воспаление на мышах. [24] Эти данные побудили нас исследовать влияние экстрактов 20E и левзеи на активацию in vitro NF- κ B, отдельно или в комбинации с дексаметазоном и другими известными ингибиторами NF- κ B. Насколько нам известно, это первый случай, когда влияние экстрактов 20E, а также экстрактов левзеи на активацию NF- κ B было изучено и дополнительно квалифицировано путем сравнения и комбинации с другими модуляторами NF- κ B. Для этого была выбрана хорошо зарекомендовавшая себя люминометрическая тест-система с использованием репортерного гена в стабильно трансфицированных клетках HeLa.NF- κ B регулирует экспрессию многих генов, которые играют роль в иммунитете, включая ген, кодирующий интерлейкин-6, плейотропный цитокин. Либерман и Балтимор обнаружили, что промоторная область гена интерлейкина-6 (IL-6) имеет предполагаемый cB-связывающий сайт NF- κ после обнаружения, что фрагмент промотора IL-6, содержащий этот сайт, специфически связывает высокоочищенный NF — Белок κ B и белок NF-cB в ядерных экстрактах клеток Jurkat, индуцированных сложным эфиром форбола. [25] Тот же самый форбол-12-миристат-13-ацетат (PMA) -индуцируемый ядерный фактор связывается с промотором IL-6 и сайтом иммуноглобулина κ B, в результате чего HeLa luc (Hela-IL-6 ) модель популярного инструмента в иммунологических исследованиях. Цитотоксичность и пролиферативные эффекты были определены с помощью анализа MTT, а методология HPLC-DAD отпечатков пальцев, которая включает определение 20E, была разработана для картирования химических структур в продуктах, полученных из левзеи, и выявления связей между составом и биоактивностью.

Материалы и методы

Стандартные вещества, растительное сырье и экстракты

20-гидроксиэкдизон (20E), партенолид, дексаметазон, генистеин, ксантогумол, хлорогеновая кислота и кофейная кислота (все Sigma-Aldrich, Великобритания) служили эталонными стандартами. Витаферин A и WF-1 (5,6-эпокси-1-оксовита-2,14,24-триенолид, выделенный из Withania frutescens (L.) Pauquy) были любезно предоставлены доктором Надей Якобо (Школа фармацевтики, Лондон).

Сухие травы и корнеплоды трехлетнего растения Leuzea carthamoides , происходящего из Исследовательской станции экологического сельского хозяйства Миккели (Финляндия) и продаваемого под торговой маркой Lujza , выращивались в районе Рорбах в Верхней Австрии и были предоставлены г-на Хуберта Фолкингера (Путцляйнсдорф, Австрия). Ваучерный образец (№ 658.291) был депонирован в гербарии Biologiezentrum der Oberösterreichischen Landesmuseen (Линц, Австрия). Растения выращивали в период с 2002 по 2005 год, собирали урожай в июне 2005 года и сушили при комнатной температуре.Перед экстракцией высушенный корневой материал разрезали на кусочки длиной не более 10 мм. С надземных частей — далее называемых травой — все основные стебли (диаметром> 10 мм) были удалены перед разрезанием на кусочки длиной 10 мм.

Корень и траву дважды мацерировали метанолом или 60% этанолом в течение 2 дней соответственно. Неочищенные метанольные экстракты фильтровали и упаривали в вакууме досуха ( R-Me , H-Me) . Метанольный экстракт травы фракционировали градиентным разделением жидкость / жидкость между водой и органическими растворителями в порядке гексана, дихлорметана и этилацетата в три этапа каждая.После объединения, роторного испарения и окончательной сушки в атмосфере азота до постоянного веса они дали три фракции ( H-Me-hex , H-Me-diclo , H-Me-etac ). 60% -ные экстракты этанола восстанавливали в вакууме до тех пор, пока большая часть этанола не выпарилась. К оставшемуся водному слою добавляли этилацетат. Этот процесс повторяли до тех пор, пока фракция этилацетата не оставалась прозрачной, после чего объединенные фракции сушили в вакууме ( R-Et60-etac, H-Et60-etac ).Кроме того, оставшаяся водная фракция корня ( R-Et60-wa ) была высушена вымораживанием и включена в исследование.

Культура клеток

Клеточная линия HeLa-IL-6 была любезно предоставлена ​​доктором М. Л. Линхардом Шмитцем, Университет Гиссена, Германия). Он содержит плазмиду, сконструированную, как описано Plaisance et al. , выше гена люциферазы, вместе с плазмидой отбора pMEP4. Эта конструкция включает белок, связывающий сигнальную последовательность рекомбинации, Jkappa, который конститутивно связан с сайтом NF-kappaB промотора интерлейкина-6 и действует как негативный регуляторный фактор. [26]

Клетки поддерживали в среде DMEM (Invitrogen, UK) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и антибиотиков (полная среда) при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO 2 и разделяли при слиянии. Клеткам позволяли расти в среде до 60-80% слияния перед сбором для анализов МТТ и NF- κ B. Плотность клеток доводили до 7,5 × 10 4 клеток / мл в среде. Используя 96 (24) луночные планшеты, 200 мкл (500 мкл) ресуспендированной клеточной суспензии на лунку инкубировали в течение 18–24 ч при 37 ° C с 5% CO 2 , влажностью 95%.

Анализы жизнеспособности и пролиферации клеток

Для анализа МТТ [3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид], впервые описанного Мосманном в 1983 г., [27] образцов, растворенных в основном в ДМСО или метаноле, разбавляли в среды для начальной концентрации 50 мкг / мл для экстрактов и 100 мкм для отдельных соединений. После удаления старой среды в каждую тестовую лунку добавляли 100 мкл среды, содержащей максимум 0,5% растворителя, исключая колонки 2 (200 мкл среды в качестве контроля), 3 (холостой пробы, 200 мкл среды без МТТ) и 4 (200 мкл тестового раствора в качестве начальная концентрация).Затем отбирали 100 мкл из колонки 4 и проводили двойные разведения от колонки 5 к колонке 11. После инкубации в течение 6 (12, 24) часов, удаления старой среды и промывки PBS (Invitrogen, UK), 150 мкл раствора МТТ ( SIGMA, 0,5 мг / мл в PBS), и планшеты инкубировали еще 90 мин. Раствор МТТ заменяли 200 мкл смеси ДМСО (10%) / изопропанол (90%), планшеты оборачивали алюминиевой фольгой и оставляли на 10 мин перед ресуспендированием и измерением с использованием фотометрического режима люминометра Anthos Lucy 1. при 570 нм (эталонный фильтр при 620 нм, ASYS, Ойгендорф, Австрия).Все показания были скорректированы путем вычитания холостого поглощения. Скорректированные значения оптической плотности конвертировали в процентные значения роста по сравнению с необработанным контролем. Жизнеспособность менее 85% контроля была определена как токсичная, жизнеспособность более 115% — как пролиферативная. Токсические эффекты выражали двумя способами: в виде максимальной нетоксичной концентрации (MNTC = 85% от соответствующего контроля) и в виде значения IC50. Образцы тестировали в трех экземплярах.

Анализ пролиферации выполняли аналогично с увеличенным числом клеток с использованием 24-луночных планшетов вместо 96-луночных планшетов.

NF-

κ B Репортерный анализ IL-6 Клетки

Hela-IL-6 выращивали до слияния в 24-луночных планшетах, среду заменяли средой, не содержащей сыворотки, и с максимальной долей растворителя 2% (0,5% в случае ДМСО) добавляли к образцам. После 40 мин инкубации добавляли стимулятор (PMA, 50 нг / мл, TNF- α 10 нг / мл), и клетки дополнительно инкубировали (37 ° C) в течение 6 или 24 часов. После лизиса с помощью 70 мл реагента для лизиса (Promega) 30 мкл из каждой лунки добавляли в двух экземплярах в белый 96-луночный планшет.Пятьдесят микролитров свежеприготовленного реагента люциферазы (Promega) добавляли автоматически с использованием системы люминометра Anthos Lucy 1. После времени реакции 10 с были записаны полученные люминометрические данные. Положительный (стимулированные только с помощью растворителя клетки) и отрицательный (клетки без стимуляции) контроли были включены в каждую чашку для расчета разницы между отрицательным контролем и образцом (или положительным контролем) в процентах от положительного контроля. Средние значения были рассчитаны из двух показаний на образец, двух образцов на планшет, трех планшетов на эксперимент и двух независимых экспериментов.В дополнение к значениям IC50 значения MNEC были рассчитаны как 85% от положительного контроля. Это облегчило сравнение диапазона активности с учетом того, что ингибирование иногда не достигало 50% от контроля или проявляло первые цитотоксические эффекты. Для сравнения образцов, которые не ингибировали, но дополнительно активировали NF- κ B, по аналогии с подходом IC50 были рассчитаны концентрации, которые вызывали повышение активации NF- κ B на 50% по сравнению с положительным контролем (AC150).Порог MNEC был установлен на уровне 115% от положительного контроля.

Комбинированные эксперименты

Чтобы изучить возможную роль 20E в общем эффекте экстрактов левзеи, 20E объединяли с сесквитерпенлактон-партенолидом, хлорогеновой и кофейной кислотами (активация PMA). Экстракты также тестировали в комбинации с различными концентрациями 20E (активация PMA и TNF- α ).

Потенциал взаимодействия 20E исследовали путем измерения комбинированного действия 20E и стандартного глюкокортикоидного дексаметазона после активации PMA и TNF- α .Соответственно, выбранные экстракты левзеи были объединены с дексаметазоном.

Статистический анализ

При необходимости, проводились попарные сравнения конкретных обработок с контрольным лечением в соответствии с планом эксперимента, как указано в подписях к рисункам. Соответствующими контрольными обработками были либо контроль носителя, либо, в случае экспериментов с комбинациями, монотерапия одним из партнеров комбинации в соответствующей концентрации. P <0,05 для двух разных монотерапий.

Анализ ВЭЖХ

Используя систему HPLC Waters ™ 900, детектор Waters ™ 996 PDA и устройство автоматического пробоотборника Waters ™ 717plus, управляемое программным обеспечением EmPower ™, был применен 80-минутный градиентный метод с использованием смесей растворителей воды (TFA 0,1%), воды — смесь ацетонитрила (65:35, TFA 0,1%) и ацетонитрила с расходом 0,9 мл / мин при 25 ° C. Система была оборудована колонкой Agilent Zorbax RX-C18 (5 мкм 4.6 × 250 мм Highchrom, Великобритания) и защитную колонку Nova-Pak® C8 3,9 × 20 мм (Waters UK Elstree, UK). Образцы (начальная концентрация экстракта 10 мг / мл, стандартные эталоны 1 мг / мл) разбавляли метанолом или смесями метанол / вода, иногда используя несколько капель ДМСО для достижения полного растворения. Перед использованием все образцы фильтровали через шприцевой фильтр Acrodisc® 0,45 мм (Fisher Scientific, Лафборо, Великобритания). Каждый раствор образца вводили в трех экземплярах (30 мкл).

По отпечатку пальца были записаны все основные пики, т.е.е. те, которые представляют более 1% от общей площади пика при интегрировании при 220 или 256 нм, и были получены качественные, полуколичественные и количественные данные. Качественный профиль: пики классифицировали в соответствии с их УФ-спектрами (210–400 нм). Помимо типичных спектров производных кофейной кислоты (CAF), флавоноидов (FLA) и экдистероидов, встречающихся у левзеи, включая характерный циклогексеноновый хромофор (ECD), мы обнаружили четыре других доминирующих типа спектров, которые были классифицированы в группы от A до D.Наконец, все другие соединения со спектрами, не соответствующими ни одному из предыдущих классов, были включены в группу «Прочие» (Таблица 1).

Полуколичественный профиль: для сравнения отпечатков пальцев соотношение между площадями под кривой (AUC) регистрировали при 220 нм, чтобы оценить долю классов соединений в экстракте / фракции.

Количественное определение: 20E использовали в качестве стандарта для расчета общего содержания фитоэкдистероидов (общий ECD), хлорогеновой кислоты для расчета общего содержания производных кофейной кислоты (общий CAF), а кверцетин использовали для определения общего содержания флавоноидов ( общий FLA) (Таблица 1).

Результаты

Влияние чистого 20E на жизнеспособность клеток и активацию NF-

κ B

20E сравнивали с синтетическими стероидами дексаметазоном и мифепристоном (RU286), природными соединениями со стероидной активностью (генистеин, ксантогумол, витаферин A, WF-1), известным NF- κ B-ингибирующим сесквитерпен партенолидом, а также кофеином. и хлорогеновые кислоты. Эффект только тестируемых соединений (без стимуляции) на жизнеспособность клеток (MTT) клеток HeLa-IL-6 измеряли через 6 и 24 часа (таблица 2).20E имел значение IC50 ниже, чем у дексаметазона, но выше, чем у мифепристона. Очевидно, более цитотоксичными оказались два витаферина, партенолид и ксантогумол, в то время как генистеин и кофейная кислота не оказали большого влияния на жизнеспособность клеток. Не наблюдалось измеримого пролиферативного эффекта на клетки HeLa при обработке 20E в стандартной процедуре МТТ с использованием 96-луночных планшетов.

Таблица 2

Влияние 20E, дексаметазона и эталонных стандартов на жизнеспособность клеток после 6 и 24 ч инкубации (анализ МТТ, диапазон тестирования 0.4–100 мкм) и на PMA-активированном NF- κ B (через 6 часов после стимуляции), определенном в клетках HeLa-IL-6

Липид SD HFD HFD + ERC HFD + EPG
TC
2. 03 ± 0,21
2,82 ± 0,24 #
2,31 ± 0,19 *
2,89 ± 0,32
2,59 ± 0,22
LDL-C
0,439 ± 0,24 0,439 0,35 #
0,70 ± 0,24 *
1,22 ± 0,34
1,08 ± 0,28 *
HDL-C
1,20 ± 0,11
9007 0,81 1. 11 ± 0,14 *
1,08 ± 0,24
0,95 ± 0,22
TG
1,79 ± 0,14
3,27 ± 0,37 #
2,53 ± 0,239 *
2,82 ± 0,37
FFA 0,76 ± 0,09 1,43 ± 0,24 # 1,11 ± 0,12 * 1,04 ± 0,12 * 1,39 ± 0,16
0 ± 0,3 2,2 2,7
. Жизнеспособность клеток (MTT) . NF- κ B ингибирование .
6 ч. . 24 ч. . 6 ч. .
MNTC a . IC50 . MNTC a . IC50 . MNEC b . IC50 .
20E 34,2 ± 4,4 69,9 ± 8,3 29,2 ± 3,0 59,4 ± 7,7 6,6 ± 2,4 31,8 ± 5,2
Dexamet 90 1001936 Dexamet 25,1 ± 3,0 > 100 7.1 ± 0,2 35,2 ± 2,7
Мифепристон 6,3 ± 0,7 32,0 ± 6,6 2,7 ± 1,2 12,5 ± 1,4 Дальнейшая активация
Генистеин 9 100 15,7 ± 0,9 98,5 ± 5,8 10,4 ± 0,3 43,4 ± 8,5
Ксантогумол 7,4 ± 0,4 24,8 ± 2,9 2,2 ± 0.4 5,8 ± 0,7 2,5 ± 0,5 3,8 ± 1,7
Витаферин A 5,1 ± 1,0 9,6 ± 1,4 1,2 ± 0,3 0,24 ± 0,11 3 0,25 ± 0,04 ± 0,3
WF-1 10,1 ± 1,2 18,2 ± 2,0 2,5 ± 0,7 0,35 ± 0,08 0,91 ± 0,07 5,2 ± 1,4
99 Парфенолид 3 20,7 ± 4,1 2,8 ± 0,5 4,6 ± 1,9 0,8 ± 0,1 3,2 ± 2,2
Кофейная кислота > 100 > 100 80,0 ± 2,7 100 48,6 ± 4,5 96,8 ± 9,0
Хлорогеновая кислота 84,7 ± 7,6 > 100 72,6 ± 5,9 > 100 37,6 ± 2,7 66,09 37,6 ± 2,7 66,01
. Жизнеспособность клеток (MTT) . NF- κ B ингибирование .
6 ч. . 24 ч. . 6 ч. .
MNTC a . IC50 . MNTC a . IC50 . MNEC b . IC50 .
20E 34,2 ± 4,4 69,9 ± 8,3 29,2 ± 3,0 59,4 ± 7,7 6,6 ± 2,4 31,8 ± 5,2
Dexamet 90 1001936 Dexamet 25,1 ± 3,0 > 100 7,1 ± 0,2 35,2 ± 2,7
Мифепристон 6,3 ± 0,7 32,0 ± 6.6 2,7 ± 1,2 12,5 ± 1,4 Дальнейшая активация
Генистеин 47,6 ± 3,2 > 100 15,7 ± 0,9 98,5 ± 5,8 10,4 ± 0,3 43,4 ± 9,199
Ксантохумол 7,4 ± 0,4 24,8 ± 2,9 2,2 ± 0,4 5,8 ± 0,7 2,5 ± 0,5 3,8 ± 1,7
Витаферин А 5.1 ± 1,0 9,6 ± 1,4 1,2 ± 0,3 0,24 ± 0,11 0,25 ± 0,04 1,4 ± 0,3
WF-1 10,1 ± 1,2 18,2 ± 2,0 2,5 0,35 ± 0,08 0,91 ± 0,07 5,2 ± 1,4
Партенолид 3,0 ± 0,3 20,7 ± 4,1 2,8 ± 0,5 4,6 ± 1,9 0,8 ± 0,1
Кофейная кислота > 100 > 100 80.0 ± 2,7 > 100 48,6 ± 4,5 96,8 ± 9,0
Хлорогеновая кислота 84,7 ± 7,6 > 100 72,6 ± 5,9 > 100 9,619 ± 36 9,619 ± 36 11,8
Таблица 2

Влияние 20E, дексаметазона и эталонных стандартов на жизнеспособность клеток через 6 и 24 ч инкубации (анализ MTT, диапазон испытаний 0,4–100 мкм) и на PMA-активированный NF- κ B (6 ч после стимуляции) определено в клетках HeLa-IL-6

2,2 2,7
. Жизнеспособность клеток (MTT) . NF- κ B ингибирование .
6 ч. . 24 ч. . 6 ч. .
MNTC a . IC50 . MNTC a . IC50 . MNEC b . IC50 .
20E 34,2 ± 4,4 69,9 ± 8,3 29,2 ± 3,0 59,4 ± 7,7 6,6 ± 2,4 31,8 ± 5,2
Dexamet 90 1001936 Dexamet 25,1 ± 3,0 > 100 7,1 ± 0,2 35,2 ± 2,7
Мифепристон 6,3 ± 0,7 32,0 ± 6.6 2,7 ± 1,2 12,5 ± 1,4 Дальнейшая активация
Генистеин 47,6 ± 3,2 > 100 15,7 ± 0,9 98,5 ± 5,8 10,4 ± 0,3 43,4 ± 9,199
Ксантохумол 7,4 ± 0,4 24,8 ± 2,9 2,2 ± 0,4 5,8 ± 0,7 2,5 ± 0,5 3,8 ± 1,7
Витаферин А 5.1 ± 1,0 9,6 ± 1,4 1,2 ± 0,3 0,24 ± 0,11 0,25 ± 0,04 1,4 ± 0,3
WF-1 10,1 ± 1,2 18,2 ± 2,0 2,5 0,35 ± 0,08 0,91 ± 0,07 5,2 ± 1,4
Партенолид 3,0 ± 0,3 20,7 ± 4,1 2,8 ± 0,5 4,6 ± 1,9 0,8 ± 0,1
Кофейная кислота > 100 > 100 80.0 ± 2,7 > 100 48,6 ± 4,5 96,8 ± 9,0
Кислота хлорогеновая 84,7 ± 7,6 > 100 72,6 ± 5,9 > 100 9,619 ± 36 9,619 ± 36 11,8
9 WF-11 ± 1,2 36 Хлорогеновая кислота
. Жизнеспособность клеток (MTT) . NF- κ B ингибирование .
6 ч. . 24 ч. . 6 ч. .
MNTC a . IC50 . MNTC a . IC50 . MNEC b . IC50 .
20E 34,2 ± 4,4 69,9 ± 8,3 29,2 ± 3,0 59.4 ± 7,7 6,6 ± 2,4 31,8 ± 5,2
Дексаметазон > 100 > 100 25,1 ± 3,0 > 100 7,1 ± 0,2 7,1 ± 0,2 35.2 ± 3 6,3 ± 0,7 32,0 ± 6,6 2,7 ± 1,2 12,5 ± 1,4 Дальнейшая активация
Genistein 47,6 ± 3,2 > 100 15.7 ± 0,9 98,5 ± 5,8 10,4 ± 0,3 43,4 ± 8,5
Ксантогумол 7,4 ± 0,4 24,8 ± 2,9 2,2 ± 0,4 5,8 ± 0,7 2,5 3,8 ± 1,7
Витаферин A 5,1 ± 1,0 9,6 ± 1,4 1,2 ± 0,3 0,24 ± 0,11 0,25 ± 0,04 1,4 ± 0,3
18,2 ± 2,0 2,5 ± 0,7 0,35 ± 0,08 0,91 ± 0,07 5,2 ± 1,4
Парфенолид 3,0 ± 0,3 20,7 ± 4,1 2,819 ± 2,8 4,6 ± 1,9 0,8 ± 0,1 3,2 ± 2,2
Кофеиновая кислота > 100 > 100 80,0 ± 2,7 > 100 48,6 ± 4,5 96,8 ± 9,0 84.7 ± 7,6 > 100 72,6 ± 5,9 > 100 37,6 ± 2,7 66,0 ± 11,8

Учитывая результаты МТТ, 20E испытывали при пяти концентрациях (2, 5, 10, 25 и 50 мкм) при модификации PMA, вызвавшей активацию NF- κ B через 6 часов. Опять же, другие синтетические и природные стероидные соединения, а также партенолид, кофейная кислота и хлорогеновая кислота были протестированы в качестве эталонов (Таблица 2). Наиболее сильное ингибирование NF- κ B проявляли партенолид, ксантогумол и витанолиды (IC50 между 1.4 и 5,2 мкм и MNEC 0,25–2,5 мкм), в то время как 20E был сопоставим с дексаметазоном и генистеином, демонстрируя умеренное, но устойчивое ингибирование со значениями IC50 между 32–43 мкм и MNEC 6,6–10,4 мкм. Он также имел аналогичные кривые «концентрация-ответ», показывающие небольшое увеличение активности NF- κ B ниже 5 мкм и явное снижение активации NF- κ B при концентрациях выше 10 мкм. Однако кривая «доза-ответ» обычно выходит на плато при приближении к 50% ингибированию, в то время как начинает вызывать токсические эффекты на уровне около 50 мкм.Поразительно, но мифепристон дал противоречивые результаты в семи независимых экспериментах, демонстрируя иногда ингибирующие, но часто активирующие эффекты. С другой стороны, кофейная и хлорогеновая кислоты лишь незначительно ингибировали NF- κ B. Стало очевидно, что для сильных ингибиторов NF- κ B диапазон между эффективным ингибированием NF- κ B и токсическими эффектами был очень узким. наша клеточная модель. Все нетоксичные концентрации, вызывающие ингибирование NF- κ B через 6 часов, становились токсичными через 24 часа.

Влияние экстрактов корня левзеи и трав на жизнеспособность клеток и активацию NF-

κ B

Экстракты и фракции корня левзеи и травы были протестированы на их влияние на жизнеспособность клеток с использованием максимальных концентраций 100 мкг / мл после 24 ч инкубации в соответствии со стандартной процедурой МТТ в 96-луночных планшетах (таблица 3). Только два экстракта, H-Me-diclo и H-Et60-etac, отрицательно повлияли на жизнеспособность клеток со значениями IC50 4,2 и 16 мкг / мл соответственно.

Таблица 3 Выход экстракции

, влияние на жизнеспособность клеток и активацию NF- κ B и основанный на ВЭЖХ / DAD количественный профиль экстрактов из корня (R) и травы (H) Leuzea carthamoides

3 936 918 1,5 ± 0,218 918 1,5 12,5 ± 1,25 9 1,4 ± 0,236 4,53
. Доходность a (%) . Влияние на жизнеспособность клеток b (MNTC) (мкг / мл) . Влияние на жизнеспособность клеток c (IC50) (мкг / мл) . Влияние на NF- κ B d (IC50 или AC150) (мкг / мл) . Всего CAF e (вычислено как CLO) (мг / г) . Всего FLA f (вычислено как QUE) (мг / г) . Всего ECD г (вычислено как 20E) (мг / г) . 20E (мг / г) .
R-Me 9,49 91,1 ± 12,7 > 100 Активация 181,2 ± 7,13 2,1 ± 0,42 32,2 ± 2,25 3 2,5
R-Et60-etac 4,93 29,1 ± 11,3 84,3 ± 14,2 Активация 378,0 ± 13,02 <0,5 46,9 ± 3,25 29.6 ± 5,30
5,2 ± 2,0
R-Et60-wa 16,54 > 100 > 100 Активация 66,3 ± 7,63 0,5 ± 0,218
125 ± 2,2
H-Me 9,94 41,2 ± 5,3 87,5 ± 3,5 Ингибирование 21,1 ± 1,19 45,5 90.8 ± 0,52 н.о. ч
15,5 ± 1,4
H-Me-hex 1,93 35,1 ± 21,1 76,0 ± 18,4 Нет эффекта 4,7 ± 0,52 <0,5
H-Me-diclo 0,83 1,9 ± 0,2 4,2 ± 0,5 Ингибирование 2,5 ± 0,19 20,7 ± 1,50 5.7 ± 0,71 <0,5
5,9 ± 1,6
H-Me-etac 0,85 54,5 ± 9,2 91,1 ± 12,7 Нет эффекта 56,6 ± 2,0198 56,6 ± 2,0198 903 <0,5 nd ч
H-Et60-etac 3,48 7,3 ± 5,9 16,3 ± 2,8 Ингибирование 61,6 ± 0,90 416,8 ± 35,3 83.3 ± 6,83 н.о. ч
12,1 ± 0,8
14,2183 8 9018 919 ± 3,5 36 Ингибирование 21,1 ± 1,19 4,219 ± 0,536 Ингибирование
. Доходность a (%) . Влияние на жизнеспособность клеток b (MNTC) (мкг / мл) . Влияние на жизнеспособность клеток c (IC50) (мкг / мл) . Влияние на NF- κ B d (IC50 или AC150) (мкг / мл) . Всего CAF e (вычислено как CLO) (мг / г) . Всего FLA f (вычислено как QUE) (мг / г) . Всего ECD г (вычислено как 20E) (мг / г) . 20E (мг / г) .
R-Me 9,49 91,1 ± 12,7 > 100 Активация 181.2 ± 7,13 2,1 ± 0,42 32,2 ± 2,25 21,1 ± 0,98
84 ± 2,5
R-Et60-etac 4,93 29,1 ± 11,3 3 378,0 ± 13,02 <0,5 46,9 ± 3,25 29,6 ± 5,30
5,2 ± 2,0
R-Et60-wa 16,54 18> 100 > 100 66.3 ± 7,63 0,5 ± 0,28 13,0 ± 1,58 12,5 ± 1,25
125 ± 2,2
H-Me 9,94 41,2 ± 5,3 45,5 ± 2,06 11,8 ± 0,52 nd ч
15,5 ± 1,4
H-Me-шестигранник 1,93 35,1 ± 21,1 76.0 ± 18,4 Нет эффекта 4,7 ± 0,52 1,4 ± 0,28 35,4 ± 4,53 <0,5
H-Me-diclo 0,83 1,9 ± 0,2 2,5 ± 0,19 20,7 ± 1,50 5,7 ± 0,71 <0,5
5,9 ± 1,6
H-Me-etac 0,85 54,5 121936 9,2 54,5 1219,2 917 Нет эффекта 56,6 ± 2,07 289,1 ± 23,78 <0,5 н.о. ч
H-Et60-etac 3,48 7,3 ± 5,9 16,3 ± 2,8 Ингибирование 61,6 ± 0,90 416,8 ± 35,3 83,3 ± н. ч
12,1 ± 0,8
Таблица 3

Выход экстракции, влияние на жизнеспособность клеток и активацию NF- κ B и количественный профиль экстрактов корня (R) и травы ( H) из Leuzea carthamoides

8 9018 919 ± 3,5 36 Ингибирование 21,1 ± 1,19 4,219 ± 0,536 Ингибирование
. Доходность a (%) . Влияние на жизнеспособность клеток b (MNTC) (мкг / мл) . Влияние на жизнеспособность клеток c (IC50) (мкг / мл) . Влияние на NF- κ B d (IC50 или AC150) (мкг / мл) . Всего CAF e (расч.как CLO) (мг / г) . Всего FLA f (вычислено как QUE) (мг / г) . Всего ECD г (вычислено как 20E) (мг / г) . 20E (мг / г) .
R-Me 9,49 91,1 ± 12,7 > 100 Активация 181,2 ± 7,13 2,1 ± 0.42 32,2 ± 2,25 21,1 ± 0,98
84 ± 2,5
R-Et60-etac 4,93 29,1 ± 11,3 84,3 ± 14,2 ,0218 ,02 Активация ,02 <0,5 46,9 ± 3,25 29,6 ± 5,30
5,2 ± 2,0
R-Et60-wa 16,54 > 100 > 100 Активация 66 3 ± 7,63 0,5 ± 0,28 13,0 ± 1,58 12,5 ± 1,25
125 ± 2,2
H-Me 9,94 41,2 ± 5,3 45,5 ± 2,06 11,8 ± 0,52 nd ч
15,5 ± 1,4
H-Me-шестигранник 1,93 35,1 ± 21,1 76.0 ± 18,4 Нет эффекта 4,7 ± 0,52 1,4 ± 0,28 35,4 ± 4,53 <0,5
H-Me-diclo 0,83 1,9 ± 0,2 2,5 ± 0,19 20,7 ± 1,50 5,7 ± 0,71 <0,5
5,9 ± 1,6
H-Me-etac 0,85 54,5 121936 9,2 54,5 1219,2 917 Нет эффекта 56,6 ± 2,07 289,1 ± 23,78 <0,5 н.о. ч
H-Et60-etac 3,48 7,3 ± 5,9 16,3 ± 2,8 Ингибирование 61,6 ± 0,90 416,8 ± 35,3 83,3 ± н. ч
12,1 ± 0,8
3 936 9039 Wa18 R3 90-399 9 918 918 918 .94 9 1,4 ± 0,236 4,53
. Доходность a (%) . Влияние на жизнеспособность клеток b (MNTC) (мкг / мл) . Влияние на жизнеспособность клеток c (IC50) (мкг / мл) . Влияние на NF- κ B d (IC50 или AC150) (мкг / мл) . Всего CAF e (вычислено как CLO) (мг / г) . Всего FLA f (расч.как QUE) (мг / г) . Всего ECD г (вычислено как 20E) (мг / г) . 20E (мг / г) .
R-Me 9,49 91,1 ± 12,7 > 100 Активация 181,2 ± 7,13 2,1 ± 0,42 32,2 ± 2,25 3 2,5
R-Et60-etac 4.93 29,1 ± 11,3 84,3 ± 14,2 Активация 378,0 ± 13,02 <0,5 46,9 ± 3,25 29,6 ± 5,30
5,2 ± 2,0 16,54 > 100 > 100 Активация 66,3 ± 7,63 0,5 ± 0,28 13,0 ± 1,58 12,5 ± 1,25
125 ± 2,2
41,2 ± 5,3 87,5 ± 3,5 Ингибирование 21,1 ± 1,19 45,5 ± 2,06 11,8 ± 0,52 н.о. ч
15,5 ± 1,4
H-Me-hex 1,93 35,1 ± 21,1 76,0 ± 18,4 Нет эффекта 4,7 ± 0,52 <0,5
H-Me-diclo 0.83 1,9 ± 0,2 4,2 ± 0,5 Ингибирование 2,5 ± 0,19 20,7 ± 1,50 5,7 ± 0,71 <0,5
5,9 ± 1,6
H-1 0,85 54,5 ± 9,2 91,1 ± 12,7 Нет эффекта 56,6 ± 2,07 289,1 ± 23,78 <0,5 nd ч
H-Et60-etac 3.48 7,3 ± 5,9 16,3 ± 2,8 Ингибирование 61,6 ± 0,90 416,8 ± 35,3 83,3 ± 6,83 н.о. ч
12,1 ± 0,8

Для проверки возможного пролиферативного эффекта анализ МТТ был повторен с увеличенным числом клеток с использованием 24-луночных планшетов (с плотностью клеток, как в NF- κ B). Через 12 и 24 часа не было значительного увеличения жизнеспособности митохондрий, что указывает на увеличение количества клеток для любого из образцов (данные не показаны).

В соответствии с этими результатами экстракты корней и трав были затем протестированы на их способность изменять индуцированную PMA активацию NF- κ B в концентрациях, не влияющих только на жизнеспособность клеток (рис. 2). Все три экстракта корня активировали NF- κ B по сравнению с контролем (значения AC150: R-Me, 84 мкг / мл; R-Et60-etac, 5,2 мкг / мл; R-Et60-wa, 125 мкг / мл. ).

Рисунок 2

Влияние экстрактов корня левзеи и трав на индуцированное PMA ингибирование NF- κ B в клетках HeLa-IL-6 (в процентах относительно контроля носителя).Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Обозначает значимость ( P <0,05).

Рисунок 2

Влияние экстрактов корня левзеи и трав на индуцированное PMA ингибирование NF- κ B в клетках HeLa-IL-6 (в процентах относительно контроля носителя). Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Обозначает значимость ( P <0,05).

Что касается экстрактов трав, H-Me показал зависимое от концентрации ингибирование NF- κ B (IC50 15.5 мкг / мл). Две его фракции не имели эффекта (гексан, этилацетат), тогда как фракция дихлорметана имела IC50 5,9 мкг / мл с более сильным ингибированием при более высоких концентрациях, чем неочищенный экстракт, но активирующим действием при концентрациях ниже 1 мкг / мл. H-Et60-etac также ингибируется в зависимости от концентрации (IC50 12,1 мкг / мл).

Комбинированное воздействие экстрактов 20E и левзеи на активацию NF-

κ B

Для оценки вклада 20E, основного экдистероида левзеи, в общий эффект экстрактов левзеи, 20E в трех концентрациях (5, 10, 25 мкм) были добавлены к корню, активирующему NF- κ . экстракты и ингибирующие экстракты трав.Концентрации экстракта были близки к их IC50 (для ингибирующих экстрактов) или AC150 (для активирующих экстрактов) (рис. 3). Хотя один 20E умеренно снижал активацию NF- κ B, после стимуляции как PMA, так и TNF α не наблюдалось устойчивой значимой или дозозависимой модификации эффектов экстрактов ни для активирующих экстрактов корней, ни для ингибирующих трав. экстракты. Неожиданно оказалось, что в некоторых случаях после совместной инкубации экстракта / 20E были обнаружены более высокие уровни NF- κ B, чем после инкубации только экстракта.

Рисунок 3

Влияние экстрактов левзеи отдельно и в сочетании с 20E (5, 10 и 25 мкм) на PMA- (a) и TNF α — (b), индуцированную активацию NF- κ B в HeLa-IL -6 ячеек. Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним экстрактом (анова с последующим тестом Бонферрони).

Рисунок 3

Влияние экстрактов левзеи отдельно и в сочетании с 20E (5, 10 и 25 мкм) на PMA- (a) и TNF α — (b) индуцированную активацию NF- κ B в HeLa- Клетки ИЛ-6.Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним экстрактом (анова с последующим тестом Бонферрони).

Чтобы установить комбинированные эффекты определенных классов соединений, присутствующих в экстрактах левзеи, а именно сесквитерпенелактонов и фенолкарбоновых кислот, 20E был объединен с партенолидом, ингибитором NF- κ B в качестве модели сесквитерпенелактона [28,29] , а также с кофейной и хлорогеновой кислотой из-за характерного присутствия фенолкарбоновых кислот в наших экстрактах левзеи (рис. 4).На ингибирующие эффекты партенолида не повлияло, в то время как добавление 20E в концентрациях от 5 до 25 мкм увеличивало NF- κ B умеренно при обработке кофеиновой и хлорогеновой кислотой через 6 часов после стимуляции PMA. Никаких изменений не наблюдалось при измерении через 6 и 24 ч после стимуляции TNF α (данные не показаны). указывает на значимость ( P <0.05) комбинированного лечения по сравнению с одним только 20E (ANOVA с последующим тестом Бонферрони).

Во всех комбинированных экспериментах первые токсические эффекты наблюдались при использовании 20E в концентрациях 50 мкм. Следовательно, эти результаты не были учтены, поскольку они потенциально могут повлиять на люминометрические показания.

Комбинированное действие дексаметазона с экстрактами 20E или левзеи на NF-

κ B

Чтобы установить возможные фармакодинамические взаимодействия между 20E, экстрактами левзеи и стероидными противовоспалительными препаратами, в Национальном федеральном федеральном округе были испытаны комбинации с дексаметазоном в различных соотношениях (5: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 5). — κ B.20E в низких концентрациях (5 и 10 мкм) не оказывал значительного влияния на эффект дексаметазона после стимуляции PMA. Более высокие концентрации 20E (25 мкм) усиливали ингибирующий эффект дексаметазона после стимуляции как PMA, так и TNF α (фиг. 5).

Рисунок 5

Влияние дексаметазона (DEX 5 мкм, 10 мкм, 25 мкм) на индуцированную PMA- (a) и TNF α — (b) активацию NF- κ B в клетках HeLa-IL-6 отдельно и в сочетании с 20E (5, 10, 25 мкм).Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним дексаметазоном с использованием ANOVA с последующим тестом Бонферрони.

Рисунок 5

Влияние дексаметазона (DEX 5 мкм, 10 мкм, 25 мкм) на PMA- (a) и TNF α — (b) индуцированную активацию NF- κ B в HeLa-IL-6 только клетки и в сочетании с 20E (5, 10, 25 мкм). Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего.* Указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним дексаметазоном с использованием ANOVA с последующим тестом Бонферрони.

Дексаметазон (20 минут предварительной инкубации, 20 мкм) в комбинации с активными экстрактами левзеи был протестирован на той же клеточной модели (рис. 6). Одно противовоспалительное лекарственное средство уменьшало PMA-индуцированную активацию NF- κ B дозозависимо, и этот эффект был добавлен к эффекту ингибирующих экстрактов, в то время как эффект активирующих экстрактов казался уменьшенным (например,грамм. водная фракция 60% этанольного экстракта листьев). Следовательно, вызываемое дексаметазоном ингибирование NF- κ B может быть усилено некоторыми экстрактами левзеи, в то время как другие эффективно нейтрализовали этот эффект.

Рисунок 6

Влияние одного дексаметазона (DEX 20 мкм), экстрактов Leuzea отдельно и комбинаций DEX / экстракт на индуцированное PMA ингибирование NF- κ B в клетках HeLa-IL-6 (в процентах относительно контроля носителя). Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего.указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним дексаметазоном с использованием ANOVA с последующим тестом Бонферрони.

Рисунок 6

Влияние одного дексаметазона (DEX 20 мкм), одного экстракта левзеи и комбинаций DEX / экстракт на индуцированное PMA ингибирование NF- κ B в клетках HeLa-IL-6 (в процентах относительно контроля носителя) . Среднее трех определений в трех повторностях и стандартная ошибка среднего. * Обозначает значимость ( P <0.указывает на значимость ( P <0,05) комбинированного лечения по сравнению с одним дексаметазоном с использованием ANOVA с последующим тестом Бонферрони.

Отпечаток пальца ВЭЖХ и содержание 20E в экстрактах левзеи

Обнаружение характерных классов соединений, описанных для Leuzea, было достигнуто путем сравнения УФ-спектров с чистыми эталонными стандартами хлорогеновой кислоты, кофейной кислоты, 20E, кверцетина и партенолида (рис. 7). Был выбран полуколичественный метод для сравнения процентов AUC суммарных пиков из этих групп (таблица 1 и рисунок 8).Экстракты корней (R-Me, R-Et60-etac) содержали преимущественно фенолкарбоновые кислоты, за которыми следовали соединения группы D и группы ECD (с 20E в качестве основного пика при t r 22 мин), но мало флавоноидов (рисунки 7 и 8 ). 20E в меньшей степени также был обнаружен в отпечатке R-Et60-wat. Однако во всех трех экстрактах корней 20E не был основным пиком даже при 256 нм, вблизи максимума поглощения соединения.

Рисунок 7

Профили

ВЭЖХ при 256 нм (а) эталонных стандартов и (б) экстракта из корня левзеи (R-Me) и профили ВЭЖХ при 220 нм двух экстрактов из травы левзеи: (в) H-Et60- etac и (d) H-Me-дикло.Пики, отличные от 20E, классифицируются согласно УФ-спектрам (см. Таблицу 1).

Рисунок 7

Профили ВЭЖХ при 256 нм (а) эталонных стандартов и (б) экстракта из корня левзеи (R-Me) и профили ВЭЖХ при 220 нм двух экстрактов из травы левзеи: (в) H-Et60 -etac и (d) H-Me-дикло. Пики, отличные от 20E, классифицируются согласно УФ-спектрам (см. Таблицу 1).

Рисунок 8

Полуколичественный профиль экстрактов левзеи в соответствии с основными группами, идентифицированными по УФ / видимому спектрам 200–400 нм.Процент суммарной AUC для каждой группы соединений, обнаруженной при 220 нм (см. Таблицу 1).

Рис. 8

Полуколичественный профиль экстрактов левзеи по основным группам, идентифицированным по УФ / видимым спектрам 200–400 нм. Процент суммарной AUC для каждой группы соединений, обнаруженной при 220 нм (см. Таблицу 1).

Экстракт травы H-Me и фракции H-Me-etac и H-Et60-etac были богаты флавоноидами и соединениями группы A (Рисунки 7 и 8). Две другие фракции не содержали флавоноидов, но преимущественно составляли компоненты без хромофоров (группа B) с небольшими частями ECD и группы C (H-Me-гекс) или в основном присутствовали соединения типа B и C (H-Me-дикло).

Содержание 20E, а также общее количество производных кофейной кислоты, общее количество флавоноидов и общее количество экдистероидов, рассчитанное на основе внешних стандартов (хлорогеновая кислота, кверцетин, 20E, соответственно), показано в таблице 3. Только в экстрактах корней мы смогли детектировать 20E (R-Me 21 мг / г, R-Et60-etac 29 мг / г, R-Et60-wa 12 мг / г). Однако другие соединения со спектром, подобным 20E, также были обнаружены в экстрактах трав (максимум 83 мг / г в H-Et60-etac). Нельзя исключить пониженное присутствие 20E в экстрактах H-Me, H-Me-etac и H-Et60-etac, поскольку отпечаток пальца показал другие пики (флавоноиды и A), элюирующиеся совместно с этим соединением.Производные кофейной кислоты варьировались от 66 мг / г (R-Et60-wa) до 378 мг / г (R-Et60-etac) в экстрактах корней и от 2,5 мг / г (H-Me-diclo) до 62 мг / г. (H-Et60-etac) в экстрактах трав. Более высокие количества флавоноидов были обнаружены только в экстрактах трав, особенно они преобладали во фракциях этилацетата (H-Me-etac 289 мг / г, H-Et60-etac 416 мг / г).

Взаимосвязь между классами метаболитов и активностью экстрактов левзеи NF-

κ B

В совокупности профиль всех экстрактов корня, активирующих NF- κ B, показал преобладание CAF вместе с 20E и другими неидентифицированными экдистероидами.Они сопровождались основными пиками для компонентов D-типа или (водная фракция) A- и B-типов. Напротив, экстракты трав, ингибирующих NF- κ B, содержали явно меньше CAF и ECD, но преобладали другие группы, такие как B в H-Me-дикло и FLA и A в H-Me и H-Et60. -etac (рис. 7c и 7d). Общая картина взаимосвязи между соединениями классов FLA, A или B и измеренным эффектом NF- κ B не может быть установлена ​​из восьми проанализированных здесь экстрактов, поскольку NF- κ B-неактивные экстракты L-Me- В hex и L-Me-etac в равной степени преобладали компоненты B или FLA / C соответственно.Не удалось найти простой, прямой корреляции между содержанием 20E, общим количеством экдистероидов, общим CAF или общим FLA и фармакологическими эффектами.

Обсуждение

Влияние чистого 20E на жизнеспособность клеток и активацию NF-

κ B

Экдистероиды, как сообщается, обладают низкой токсичностью, со значениями LD50 выше 10 мг / кг у мышей после перорального или внутрибрюшинного введения; фактически предполагается постоянное безвредное воздействие пищи на животных и человека. [5] Также результаты in vitro для 20E в четырех разных типах клеток, включая HeLa, показали низкую цитотоксичность с IC50 ≥ 50 мкг / мл. [30] Это согласуется с нашими результатами для клеток HeLa-IL-6, где цитотоксичность для 20E была немного выше, чем для дексаметазона.

Различные фармакологические эффекты экдистероидов и экдистероидсодержащих растений стимулировали предположения о возможном вмешательстве в стероидные метаболические пути млекопитающих. [1,5] Однако предполагается, что экдистероиды, включая 20E, не взаимодействуют со стероидными рецепторами у млекопитающих и даже широко используются в коммерческих тестовых наборах in vitro для экспрессии индуцируемых экдистероидами трансгенов генов млекопитающих.В этих системах высококонцентрированные понастерон и муристерон А действуют как индукторы, в то время как другие экдистероиды оказались неактивными. [5] Однако иногда возникает вопрос, действительно ли экдистероиды не влияют на физиологию клеток млекопитающих. Oehme и др. . [31] , например, сообщил об ингибировании апоптоза, индуцированного Fas-лигандом и TNF-лигандом, муристероном А на уровне каспазы-8. В дополнение к этому противоречию следует отметить, что некоторые стероиды и нестероиды растительного происхождения, включая кукурбитацины, витанолиды, стильбеноиды или лигнаны, которые взаимодействуют со стероидными системами позвоночных, оказались лигандами эдистероидных рецепторов, т.е.е. аналоги насекомых рецепторов ядерных гормонов млекопитающих, входящие в суперсемейство регуляторов транскрипции. [32–34]

Наши данные, полученные в модели HeLa-IL-6, предполагают вызванное 20E ингибирование NF- κ B, сравнимое с ингибированием дексаметазоном или генистеином, которые, как известно, ингибируют этот ядерный фактор. in vivo и in vitro . Тем не менее, сравнение с партенолидом, витанолидами и ксантогумолом показывает, что 20E может не достичь эффективности более мощных ингибиторов NF- κ B растительного происхождения.

Признано, что аномальный домохозяйство NF- κ B в раковых клетках — один из механизмов, ответственных за предотвращение гибели клеток в токсичных условиях для нормальных клеток — дает ингибиторам NF- κ B возможность нацеливаться на раковые клетки за счет снижения повышенных исходных уровней, подавляя «нормальный» апоптотический ответ. [35] Наши результаты показывают определенное соответствие между мощным ингибированием NF- κ B (6 часов) и последующей гибелью клеток (24 часа) со сравнимыми значениями IC50 для всех веществ.Наряду с этим связь между ингибированием NF- κ B стероидами, включая муристерон А и понастерон, и последующей индукцией апоптоза уже поддерживалась Donjerković et al. ., [23] при последующем измерении жизнеспособности клеток. моменты времени в ячейках WEHI-231.

Несмотря на ингибирующее действие одного 20E в концентрациях от 7 до 50 мкм, остаются вопросы из-за отсутствия ожидаемого аддитивного или синергетического ингибирования при сочетании с партенолидом, дексаметазоном или экстрактами левзеи.Иногда для некоторых из этих комбинаций обнаруживались даже противоположные эффекты.

Противовоспалительные эффекты 20E были описаны некоторыми авторами (как описано Lafont и Dinan 2003), [5] , но есть также сообщения, которые не могут подтвердить такие эффекты in vivo . [7] Harmatha et al . [8] не смог обнаружить сниженную продукцию NO перитонеальными макрофагами при стимуляции LPS или интерфероном, даже после инкубации с 20E до 100 мкм.Наши эксперименты являются первым сообщением о 20E как модулятора активации NF- κ B и предполагают, что необходимы дальнейшие тесты in vitro и in vivo. Ингибирующий эффект наблюдался как после стимуляции PMA, так и TNF α , что может указывать на независимость от задействованного пути; либо классический канонический, либо альтернативный. [36]

Влияние экстрактов корня левзеи и трав на жизнеспособность клеток и активацию NF-

κ B

Традиционные препараты левзеи представляют собой гидроэтанольные экстракты корня, которые, как сообщается, содержат 0.04–0,81% от 20E. [11] С нашей метанольной (гидроэтанольной) мацерацией 20E был получен в концентрации 20 мг / г корня (35 мг / г корня), что находится в среднем диапазоне предыдущих отчетов. Общее содержание экдистероидов в экстрактах некоторых трав было сопоставимо с таковым в экстрактах корней, что позволяет предположить, что экстракты, обогащенные экдистероидами, также могут быть получены (зарегистрированный диапазон 20E в листьях 0,03–1,22% [11] ). Надземные части могут быть экономической альтернативой корням, потому что многолетние растения допускают постоянное культивирование и повторный сбор урожая. [30]

Протестированные экстракты и фракции демонстрируют различные химические профили и частично противоположные фармакологические эффекты. Экстракты, полученные из трав, были либо эффективными ингибиторами NF- κ B, либо вообще не влияли на активацию NF- κ B. Экстракты корней вызывали умеренное дальнейшее увеличение PMA или TNF- α , индуцированной активации NF- κ B. Этот эффект был наиболее выражен для экстракта с наибольшим содержанием 20E (29,6 мг / г; R-Et60-etac).Если рассматривать не только 20E, но и все экдистероидоподобные соединения, экстракты с самым высоким содержанием экдистероидов (83; 47; 35 мг / мл) ингибируют, активируют или не оказывают никакого эффекта.

Хотя CAF преобладает в экстрактах корней с NF- κ B сверхактивирующими эффектами, решающая роль является спорной, учитывая аналогичное общее содержание CAF в активирующем R-Et60-wa (66 мг / г) и ингибирующем H- Et60-etac (62 мг / г) экстракты. Точно так же концентрация флавоноидов, которые были более характерны для тестируемых здесь экстрактов трав, не коррелировала с влиянием на NF- κ B.Помимо необходимого разделения отдельных компонентов в группах ECD, CAF и FLA, можно сделать вывод, что за измеряемую активность ответственны соединения, отличные от типичных веществ, рассматриваемых здесь для отпечатков пальцев. Левзея содержит интересное сочетание фармакологически активных классов, к которым можно отнести традиционно описанные и доказанные эффекты. Помимо экдистероидов 20E, макистерона C, полиподина B и аджугастерона C [37,38] и флавоноидов, [39,40] больше внимания можно уделить сесквитерпеновым лактонам, [28,29] тиофенполиацетиленам, [41,42] и стильбены, [43] , которые известны своими цитотоксическими и противовоспалительными свойствами в различных моделях, включающих модуляцию активности NF- κ B (см. Также обзор Кокоски и Яновской [11] ).Также уже предлагались N-ферулоилсеротонины. [8] Различная активность составляющих групп в отношении отдельных физиологических мишеней может вызвать непредсказуемые экспериментальные эффекты, когда тестируются целые смеси с определенными пропорциями этих групп. С другой стороны, комбинация B-ингибирующего и активирующего принципов NF- κ в Leuzea может играть роль в его иммуномодулирующем и адаптогенном применении ввиду ранее предполагаемых биполярных умеренных эффектов, ответственных за формирование клеточного ответа на ослабленная стрессовая реакция. [44]

Вклад 20E в действие in vitro на активацию NF-

κ B экстрактов левзеи

Сомнения относительно вклада 20E в противовоспалительные эффекты экстрактов левзеи были выражены Harmata et al . (2008). [8] Хотя 20E сам по себе был ингибитором NF- κ B в нашей тестовой модели, аналогичные неопределенности возникают в отношении вклада 20E в ингибирование NF- κ B, вызванное экстрактами левзеи по трем причинам.Во-первых, химическая структура активирующих, ингибирующих и неактивных экстрактов: по отпечаткам пальцев наиболее сильными ингибиторами были экстракты с содержанием менее 0,5 мг 20E / г растительного материала или явно низким содержанием 20E по сравнению с другими составляющими. В экстрактах, содержащих больше активированного 20E NF- κ B, концентрация 20E в клеточной среде для диапазона активности экстрактов намного ниже, чем в тестах с одним 20E.

Вторая причина — это минимальное влияние добавления 20E к экстрактам: во время наших экспериментов с добавками мы увеличили естественное содержание 20E в тестируемых экстрактах (максимум 29 мг / г) путем добавления чистого 20E.Используя концентрацию экстракта на уровне примерно IC50 (максимум 100 мг / мл), естественное содержание 20E экстракта в среде максимум 1,3 нг / мл было искусственно увеличено с 2,28 мкг / мл до 11,4 мкг / мл чистого 20E. Однако активность экстракта существенно не изменилась по сравнению с одним экстрактом.

Последней причиной является минимальное воздействие при сочетании 20E с другими ингибиторами NF- κ B: добавление 20E к партенолиду (соотношение 1: 10–2: 1), кофейной кислоте (1: 2–10: 1) и хлорогеновая кислота (1: 1–10: 1) либо не оказали существенного влияния на эффект, полученный при использовании одних только других соединений, либо даже увеличили активность NF- κ B.Также комбинации с дексаметазоном (1: 10–5: 1) не показали значительного эффекта.

Таким образом, ни 20E, ни экдистероидоподобные соединения, по-видимому, не отвечают за модулирующие эффекты экстрактов левзеи NF- κ B. Хотя экстракты левзеи могут быть наделены интересным иммуномодулирующим потенциалом, 20E не объясняет модуляцию κ B NF-. В дополнение к его сомнительному вкладу в противовоспалительное действие, пригодность 20E в качестве аналитического маркера при использовании стандартных методов HPLC-UV ограничена.Несомненно, характерный компонент, указывающий на качество, трудности в обнаружении в УФ / видимом диапазоне по сравнению с более заметными соединениями и различение структурно очень похожих экдистероидов в прошлом приводили к определенному нежеланию обнаруживать 20E стандартными методами ВЭЖХ в смесях. [45]

Хотя 20E не всегда можно было обнаружить с помощью нашего метода отпечатков пальцев, мы показываем, что анализ ВЭЖХ может предоставить полезную информацию о составе экстракта для качественного контроля. Это может быть далее развито для стандартного количественного определения 20E и, что еще более важно, для других составляющих групп (сесквитерпенлактонов, стильбенов).Примечательно, что многие продукты Leuzea, предлагаемые для продажи в Интернете, не имеют спецификации используемой части растения или типа экстракта и декларируют только содержание 20E. Доказательства связи между концентрацией 20E и фармакологическим действием препаратов левзеи в основном отсутствуют. Наши результаты подтверждают предыдущие сомнения и предполагают, что необходимы более сложные стандарты качества для экстрактов левзеи.

Влияние дексаметазона в сочетании с экстрактами 20E или левзеи на NF-

κ B

Способность глюкокортикоидов подавлять иммунную функцию тесно связана со способностью рецептора глюкокортикоидов (GR) ингибировать транскрипционную активность NF- κ B.Это осуществляется посредством прямой физической ассоциации вместе с дополнительным механизмом антагонизма, включающим конкуренцию за общие механизмы транскрипционных кофакторов антагонизма NF- κ B-GR. [46] Точки пересечения этих двух физиологических медиаторов воспаления — популярная тема для исследований. [47] Дексаметазон предотвращает активацию NF- κ B с помощью различных внеядерных и внутриядерных механизмов. Например, повышающая регуляция синтеза I κ Ba, которая зависит от ранней и временной активации NF- κ B, связывание лиганда с C-концом глюкокортикоидных рецепторов, способствующее ядерной транслокации рецептора, а также связывание с Было высказано предположение, что NF- κ B через ДНК-связывающий домен глюкокортикоидного рецептора. [48–50] Эффект подавления NF- κ B дексаметазоном в клетках HeLa, обнаруженный в наших экспериментах, был ранее описан. [51] В отличие от других методов обнаружения модуляции NF- κ B в большей степени восходящего потока, люминометрическое обнаружение экспрессии IL-6 позволяет измерить общий, конечный результат перекрестного разговора глюкокортикоида-NF- κ B при транскрипционный уровень и не зависит от реальных задействованных вышестоящих механизмов.

Результаты после добавления 20E к клеткам, обработанным дексаметазоном, не были окончательными.Напротив, значительная модификация эффекта дексаметазона на активацию NF- κ B была обнаружена как для ингибирования, так и для активации экстрактов левзеи. Следовательно, наши результаты предполагают, что 20E не может существенно влиять на другие стероидные методы лечения с точки зрения опосредованной NF- κ B иммунореактивности на клеточном уровне, в то время как экстракты левзеи влияют. Если подтвержден in vivo , этот потенциал может открыть возможности для более низких концентраций стероидов, когда требуется ингибирование NF- κ B, как при некоторых противовоспалительных методах лечения или сопутствующем лечении рака.С другой стороны, наши результаты требуют дальнейшего изучения широкого использования препаратов левзеи в анаболических целях, где можно ожидать комбинации с другими стероидами. Возможные противоположные эффекты в зависимости от состава экстракта указывают на лучшую стандартизацию и фармаконадзор.

Выводы

Таким образом, 20E впервые описывается здесь как in vitro ингибитор активации NF- κ B, но это соединение вряд ли будет основным игроком в ингибирующих эффектах NF- κ B, проявляемых некоторые экстракты левзеи.Судя по нашим результатам, следует проявлять осторожность в отношении продаваемых экстрактов левзеи, которые не стандартизированы или стандартизированы только для 20E, поскольку естественные вариации химического состава исходного материала и его экстрактов могут вызывать различные эффекты. Что еще более важно, наши результаты указывают на потенциал взаимодействия левзеи со стероидными противовоспалительными препаратами. Это должно быть дополнительно изучено in vivo , чтобы исключить риски при использовании не по назначению. Однако это может также предоставить возможности, когда желательно снижение дозы стандартных стероидных препаратов.

Декларации

Конфликт интересов

Автор (ы) заявляют (ют), что у них нет конфликта интересов, который необходимо раскрывать.

Финансирование

Это исследование не получало специального гранта от какого-либо финансирующего агентства в государственном, коммерческом или некоммерческом секторах.

Сокращения

  • 20E

  • AC150

    Активирующая концентрация 150%

  • CAF

    Производные кофейной кислоты (аттестованные в соответствии со спектром UV / VIS по отпечатку пальца HPLC)

  • ECD

    ecdysteroids / VIS спектр)

  • FLA

    флавоноиды (квалифицированы в соответствии с УФ / видимым спектром)

  • MNEC

    максимальная не влияющая концентрация

Благодарности

Авторы благодарны профессору М.L. Lienhard Schmitz, Университет Гиссена, Германия, за любезно предоставленную линию клеток HeLa-IL-6 и полезные комментарии по их биохимии.

Список литературы

1

Холодова

УД

.

Фитоэкдистероиды: биологические эффекты, применение в сельском хозяйстве и дополнительной медицине

.

Укр Биохим Ж

2001

;

73

:

21

29

,2

Курнуков

AG

,

Сыров

VN

.

[Противовоспалительные свойства экдистерона]

.

Мед Ж Узбекистана

1988

;

10

:

27

29

[на русском языке] .3

Сахибов

AD

et al.

[Экспериментальный анализ иммунотропного действия фитоэкдистероидов]

.

Докл Акад. Наук Узбекской ССР

1989

;

8

:

55

57

[на русском языке] .4

Фомовская

GN

et al.

[Иммуномодулирующее действие экдистероидов]

.

Укр Биохим Ж

1992

;

64

:

56

61

[на украинском языке] .5

Lafont

R

,

Dinan

L

.

Практическое использование экдистероидов у млекопитающих, включая человека: обновление

.

J Insect Sci

2003

;

3

:

1

30

.6

Тренин

DS

,

Володин

В.В.

20-гидроксиэкдизон как модулятор лимфоцитов и нейтрофилов человека: оценка in vitro

.

Arch Insect Biochem Physiol

1999

;

41

:

156

161

,7

Танигучи

SF

et al.

Влияние Pfaffia iresinoides на экспериментальный воспалительный процесс у крыс

.

Phytother Res

1997

;

11

:

568

571

.8

Harmatha

J

et al.

Отсутствие влияния обычных фитоэкдистероидов на продукцию оксида азота иммуноактивированными макрофагами млекопитающих

.

Стероиды

2008

;

73

:

466

471

,9

Соколов

ПД

. (глав. красный)

[Растительные Ресурсы СССР. Цветковые растения. Их Химический состав. Использование.]

Санкт-Петербург

:

Семейство сложноцветных

,

1993

[на русском языке].10

Оплетал

L

et al.

[Фитотерапевтические аспекты болезней системы кровообращения 6. Leusea carthamoides (WILLD.) DC: современное состояние исследований и возможное использование таксона]

.

Чешский Слов Фарм

1997

;

46

:

247

255

[на чешском языке] .11

Kokoska

L

,

Janovska

D

.

Химия и фармакология Rhaponticum carthamoides : обзор

.

Фитохимия

2009

;

70

:

842

855

.12

Slama

K

et al.

Гормоны насекомых у позвоночных: анаболические эффекты 20-гидроксиэкдизона у японского перепела

.

Experientia

1996

;

52

:

702

706

,13

Гаджиева

RM

и др.

[Сравнительное исследование анаболической активности веществ растительного происхождения: Экдистен, леветон и Прайм Плюс]

.

Эксп Клин Фармакол

1995

;

58

:

46

48

[на русском языке] .14

Гольдберг

ED

et al.

Влияние экстрактов лекарственных растений на развитие метастатического процесса

.

Булл Эксп Биол Мед

2004

;

138

:

288

294

.15

Gaube

F

et al.

Эффекты Leuzea carthamoides DC.на клетках аденокарциномы рака молочной железы человека MCF-7, обнаруженных с помощью профилирования экспрессии генов и функциональных анализов

.

Planta Med

2008

;

74

:

1701

1708

.16

Худзенко

OP

et al.

[Лекарственные растения как потенциальные источники антигипоксических препаратов с термозащитными свойствами]

.

Фарм Ж

1992

;

0

:

62

64

[на украинском языке].17

Смоленова

Л

и др.

[Клиническое исследование действия экстракта Leuzea carthamoides на пожилых людей]

.

Фарм Обзор

1993

;

62

:

197

202

. 18

Азизов

AP

,

Сейфулла

RD

.

[Влияние элтона, леветона, фитотона и адаптона на работоспособность экспериментальных животных]

.

Эксп Клин Фармакол

1998

;

61

:

61

63

[на русском языке].19

Азизов

AP

et al.

Влияние настойки левзеи и леветона на гуморальный иммунитет спортсменов]

.

Эксп Клин Фармакол

1997

;

60

:

47

48

[на русском языке] .20

Кормош

N

и др.

Влияние комбинации экстрактов из нескольких растений на клеточный и гуморальный иммунитет пациентов с распространенным раком яичников

.

Phytother Res

2006

;

20

:

424

425

.21

Володин

В.В.

и др.

[Биологическая активность 20-гидроксиэкдизона и его ацетатов]

.

Растительные ресурсы

1999

;

2

:

76

81

[на русском языке] .22

Li

Q

,

Verma

IM

.

Регуляция NF-kappaB в иммунной системе

.

Nat Rev Immunol

2002

;

2

:

725

734

.23

Donjerković

D

et al.

Опосредованная стероидами и ретиноидами остановка роста и апоптоз в клетках WEHI-231: роль NF- κ B, c-Myc и CKI p27kip1

.

евро J Immunol

2000

;

30

:

1154

1161

.24

Sun

Y

,

Yasukawa

K

.

Новые противовоспалительные экдистероиды эргостанового типа из склероция Polyporus umbellatus

.

Bioorg Med Chem Lett

2008

;

18

:

3417

3420

.25

Либерман

TA

,

Балтимор

D

.

Активация экспрессии гена мтерлейкина-6 посредством фактора транскрипции NF-KB

.

Mol Cell Biol

1990

;

10

:

2317

2334

.26

Plaisance

S

et al.

Белок, связывающий сигнальную последовательность рекомбинации, Jkappa конститутивно связан с сайтом NF-kappaB промотора интерлейкина-6 и действует как негативный регуляторный фактор

.

Mol Cell Biol

1997

;

17

:

3733

3743

.27

Mosmann

T

.

Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживаемости: применение для анализа пролиферации и цитотоксичности

.

J Immunol Methods

1983

;

65

:

55

63

,28

Nowak

G

et al.

[Сесквитерпеновые лактоны ххх. Цинаропикрин у видов подтрибы centaureinae]

.

Acta Soc Bot Pol

1986

;

55

:

17

22

[на польском языке] 29

Nowak

G

et al.

[Сесквитерпеновые лактоны xxxiv. Guaianolides в роду Leuzea D.C]

.

Acta Soc Bot Pol

1988

;

57

:

157

164

[на польском языке] 30

Biskup

E

,

Lojkowska

E

.

Оценка биологической активности экстрактов Rhaponticum carthamoides

.

J Med Plants Res

2009

;

3

:

1092

1098

.31

Oehme

I

et al.

Агонисты экдизон-индуцируемой системы экспрессии млекопитающих ингибируют апоптоз, индуцированный Fas-лигандом и TRAIL, в клеточной линии карциномы толстой кишки человека RKO

.

Разница в гибели клеток

2006

;

13

:

189

201

.32

Динан

L

et al.

Кукурбитацины — антагонисты стероидных гормонов насекомых, действующие на рецептор экдистероидов

.

Biochem J

1997

;

27

:

643

650

.33

Динан

L

et al.

Растительные натуральные продукты как агонисты и антагонисты стероидных рецепторов насекомых

.

Наука о пестицидах

1999

;

55

:

331

335

.34

Harmatha

J

,

Dinan

L

.

Биологическая активность лигнанов и стильбеноидов, связанная с химическими взаимодействиями растений и насекомых

.

Phytochem Rev

2003

;

2

:

321

330

0,35

Takahashi

N

et al.

Ингибирование апоптоза, опосредованного 53BP2S, ядерным фактором κ B и белками семейства Bcl-2

.

Genes Cells

2005

;

10

:

803

811

,36

Niederberger

E

,

Geisslinger

G

.

Путь IKK-NF- κ B: источник новых молекулярных мишеней лекарств в терапии боли?

FASEB J

2008

;

22

:

3432

3442

.37

Girault

JP

et al.

Экдистероиды leuzea-carthamoides

.

Фитохимия

1988

;

27

:

737

742

.38

Pis

J

et al.

Экдистероиды из корней Leuzea carthamoides

.

Фитохимия

1994

;

37

:

707

711

.39

Варга

E

et al.

Флавоноиды из Leuzea carthamoides DC

.

Herba Hungarica

1990

;

29

:

51

55

.40

Sharaf

M

et al.

Два флавонольных 5-O-гликозида из корней Leuzea carthamoides

.

Фитотерапия

2001

;

72

:

940

942

.41

Szendrei

K

et al.

Ацетилены тиофена из корней левзеи

.

Фитохимия

1984

;

23

:

901

902

.42

Chobot

V

et al.

Фототоксическая активность тиофенполиацетилена из Leuzea carthamoides

.

Фитотерапия

2006

;

77

:

194

198

.43

Хайду

Z

et al.

Стильбен из корней Leuzea carthamoides

.

J Nat Prod

1998

;

61

:

1298

1299

.44

Паносиан

A

et al.

Адаптогены растений III. Более ранние и более свежие концепции и аспекты их действия

.

Фитомедицина

1999

;

6

:

287

300

.45

Динан

L

et al.

Хроматографические процедуры выделения стероидов растений

.

J Chromatogr A

2001

;

935

:

105

123

.46

McKay

LI

,

Cidlowski

JA

.

Перекрестная связь между ядерным фактором каппа B и рецепторами стероидных гормонов: механизмы взаимного антагонизма

.

Мол эндокринол

1998

;

12

:

45

56

.47

McKay

LI

,

Cidlowski

JA

.

Молекулярный контроль иммунных / воспалительных реакций: взаимодействия между ядерным фактором каппа B и путями передачи сигналов стероидным рецептором

.

Endocr Ред.

1999

;

20

:

435

459

.48

Scheinman

RI

et al.

Характеристика механизмов, участвующих в трансрепрессии NF-каппа B активированными глюкокортикоидными рецепторами

.

Mol Cell Biol

1995

;

15

:

943

953

.49

Кастро-Кальдас

M

et al.

Дексаметазон предотвращает индуцированную интерлейкином-1b активацию ядерного фактора-kB, регулируя синтез IkB-a в лимфобластных клетках

.

Медиаторы воспаления

2003

;

12

:

37

46

.50

Гарсайд

H

et al.

Глюкокортикоидные лиганды определяют различные взаимодействия с NF- κ B за счет аллостерических эффектов на ДНК-связывающий домен глюкокортикоидного рецептора

.

J Biol Chem

2004

;

279

:

50050

50059

.51

Дворжак

Z

et al.

Дифференциальное действие выбранных природных соединений с противовоспалительной активностью на рецептор глюкокортикоидов и NF-kappaB в клетках HeLa

.

Chem Biol Interact

2006

;

159

:

117

128

.

© 2011 Авторы.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *