Как вырастить мукор: как вырастить мукор ( плесень на хлебе) за 1 день? 50 баллов и вообще возможно ли это?

VII. Домашнее задание

Продолжаем готовить доклады о культурных растениях.

Урок и выступление обучающихся сопровождается презентацией. Приложение 3

Краткое сообщение про гриб мукор. Грибы паразиты мукор: осоенности, опасность

Вопрос 1. Где поселяется плесень?

Плесень любит влажность, тепло и сырость. И не обязательно присутствие кислорода.

Вопрос 2. Для чего нужны дрожжи?

Дрожжи разлагают сахар на спирт и углекислый газ. Освобождающаяся при этом энергия используется дрожжами для обеспечения их жизнедеятельности. Пузырьки углекислого газа, образующиеся в тесте, делают его лёгким и пористым.

Лабораторная работа № 7. Плесневый гриб мукор.

1. Вырастите на хлебе белую плесень. Для этого на слой влажного песка, насыпанного в тарелку, положите кусок хлеба, накройте его другой тарелкой и поставьте в тёплое место. Через несколько дней на хлебе появится пушок, состоящий из тонких нитей мукора. Рассмотрите в лупу плесень в начале её развития и позднее, при образовании чёрных головок со спорами.

3. Рассмотрите микропрепарат при малом и большом увеличении. Найдите грибницу, спорангии и споры.

Вывод: мукор – плесневый гриб. Гифы состоят из одной клетки. При размножении на концах гиф появляются шарики (спорангии). Сначала бесцветные, а потом, по мере созревания спор, чернеют. Когда лопаются спорангии, споры высвобождаются.

Лабораторная работа № 8. Строение дрожжей.

1. Разведите в тёплой воде небольшой кусочек дрожжей. Наберите в пипетку и нанесите 1 -2 капли воды с клетками дрожжей на предметное стекло. Накройте покровным стёклышком и рассмотрите препарат с помощью микроскопа при малом и большом увеличении. Сравните увиденное с рисунком 50. Найдите отдельные клетки дрожжей, на их поверхности рассмотрите выросты — почки.

На рисунке 50 в учебнике точно такие дрожжи и тоже почкуются.

3. На основе проведённых исследований сформулируйте выводы.

Вывод: Грибы-дрожжи – это одноклеточные организмы, имеющие форму шарика. Живут в питательной жидкости, богатой сахаром. Размножаются дрожжи почкованием. У них есть клеточная стенка, вакуоль, цитоплазма, ядро, при почковании у материнской клетки появляется почка (иногда отделяется от материнской клетки).

Вопрос 1. Какое строение имеет мукор?

Гифы мукора состоят из одной клетки. При размножении на концах гиф появляются шарики (спорангии со спорами).

Вопрос 2. Как он размножается?

При размножении на концах гиф появляются шарики (спорангии со спорами). Сначала бесцветные, а потом, по мере созревания спор, чернеют. Когда лопаются спорангии, споры высвобождаются. Споры разносятся.

Вопрос 3. Из чего получают лекарство пенициллин?

Лекарство пенициллин получают из плесневого гриба пеницилл. В клетках пеницилла образуется вещество, убивающее некоторые болезнетворные бактерии. Его специально разводят, чтобы получать лекарства для лечения многих болезней.

Вопрос 4. Чем пеницилл отличается от мукора? Что общего у этих плесневых грибов?

Грибница пеницилла, в отличие от грибницы мукора, состоит из ветвящихся нитей, разделённых перегородками на клетки. Споры пеницилла расположены не в головках, как у мукора, а на концах некоторых нитей грибницы в мелких кисточках.

Вопрос 5. В чём особенность строения и размножения дрожжей? Для чего разводят дрожжи?

Эти микроскопические грибы состоят из одной клетки, имеющей форму шарика. Они живут в питательной жидкости, богатой сахаром. Размножаются дрожжи почкованием. Сначала на взрослой клетке появляется небольшая выпуклость. Она увеличивается и превращается в самостоятельную клетку, которая вскоре отделяется от материнской.

Дрожжи разводят для того, чтобы они «ожили» и стали «работать» быстрее. Тогда тесто станет подниматься, т.е. станет пышным.

Подумайте

Как можно объяснить появление плесневых грибов на хлебе, фруктах и других продуктах?

В воздухе в разных формах жизни обитают плесневые грибы. Им необходима среда для их размножения. Чаще всего это сыроватый или влажный хлеб. Продукты питания являются местом для размножения, то есть для дальнейшего развития плесневых грибов. Главным условием появления плесени является влажность. Вторым условием является температура воздуха. При более высокой температуре плесень появляется и развивается быстрее.

Цель урока:
— дать общую характеристику плесневых грибов, рассмотреть роль плесневых грибов в природе и значение для человека.

Задачи урока:
— развивать понятие о многообразии живых организмов;
— раскрыть влияние плесневых грибов на здоровье человека;
— воспитывать культуру научного труда в ходе учебно-эксперементальной деятельности;
— изучить особенности строения плесневых грибов на примере гриба мукора.

Оборудование урока:
— учебник, тетради для практических работ, проектор и мультимедийная доска, слайды «Строение плесневых грибов», ноутбуки с подключением к сети Internet, материалы сайта http://www.virtulab.net «Виртуальная физика биология химия экология | Виртуальная лаборатория ВиртуЛаб» (лабораторная работа «Строение плесневого гриба мукора»).

Ход урока:

I. Вступительное слово учителя
Мы с вами продолжаем путешествие по стране знаний, дороги которого на этот раз пролегают через царство Грибов. На прошлом уроке мы дали общую характеристику грибам. Сегодня же более подробно рассмотрим плесневые грибы. Поговорим об их роли в природе и в жизни человека. А также рассмотрим под микроскопом строение плесневого гриба, но начнем мы с проверки домашнего задания.

II. Проверка домашнего задания
Решение заданий ЕГЭ по теме «Царство грибы. Общая характеристика»:
А1. Грибы – это представители:
1) прокариотов
2) эукариотов
3) самых древних организмов
4) растений
А2. Что образуется при сожительстве мицелия и гриба с корними растения?
1) микропиле
2) микориза
3) зигота
4) ризоиды
А3. Как грибы поглощают питательные вещества?
1) корневыми волосками
2) устьицами
3) микропиле
4) всей поверхностью тела
А4. Как называется наука, изучающая грибы?
1) ботаника
2) палеоботаника
3) экология
4) микология
В1. На сколько групп по типу питания делятся грибы?

III. Общая характеристика плесневых грибов

Кроме шляпочных, в природе встречаются и другие грибы, например, плесени. Они иногда так малы, что рассмотреть их удается только под микроскопом. Таков гриб мукор (слайд «Мукор»), образующий плесень. Этот гриб часто появляется на хлебе, овощах, на конском навозе в виде пушистого белого налета, который через некоторое время становится черным.

Слайд «Мукор»

Размножается мукор спорами. Некоторые нити грибницы поднимаются вверх и расширяются на концах. В этих расширениях, имеющих вид округлых черных головок, образуются споры (слайд «Головка мукора со спорами»).

Слайд «Головка мукора со спорами»

После созревания спор головки вскрываются. Споры разносятся. При благоприятных условиях они прорастают в грибницу. Грибница мукора, как и всех грибов, не имеет хлорофилла. Мукор питается готовыми органическими веществами.

IV. Плесневые грибы и человек

Существует большое количество фактов, свидетельствующих об отрицательном влиянии плесневых грибов на организм человека. Многие грибы вырабатывают ядовитые, галлюциногенные, аллергенные вещества. С другой стороны мир уже невозможно представить без антибиотиков, многочисленных лекарств и пищевых продуктов, вырабатываемых с помощью грибов. Однако, непосредственное влияние плесневых грибов на здоровье человека еще недостаточно изучено. Для того что бы меньше сталкиваться с вредным влиянием плесени надо следовать простым правилам: продукты необходимо его употреблять только в течение срока годности, обозначенного на этикетке; необходимо соблюдать санитарно-гигиенических условия в помещении где вы живете или часто находитесь.

А сейчас мы с вами рассмотрим под микроскопом строение плесневого гриба мукора.

V. Лабораторная работа

Цель нашей работы сегодня — изучить строение плесневого гриба мукора под микроскопом. Для этого мы воспользуемся специальным оборудованием: микроскопом, предметным и покровным стеклом, пинцетом, пипеткой, метиленовым синим красителем, лотком.

Октрываем браузер FireFox, вводим адрес http://www.virtulab.net, окрываем раздел «Биология. 7 класс» и выбираем работу «Строение плесневого гриба мукора». Далее следуем инструкции.

См. ход работы на рисунке.

© Copyright: Солодкая Галина Андреевна, 2013

Рецензии

Ежедневная аудитория портала Проза.ру — порядка 100 тысяч посетителей, которые в общей сумме просматривают более полумиллиона страниц по данным счетчика посещаемости, который расположен справа от этого текста. В каждой графе указано по две цифры: количество просмотров и количество посетителей.

На земле насчитывается невероятно большое количество представителей этого огромного семейства, включающего более ста тысяч видов. Грибы очень сильно отличаются друг от друга: по внешнему виду, среде обитания, есть и съедобные, опасные и полезные. Но объединяет их то, что у всех грибов есть грибница и мицелий. И, как известно, плесень также является грибом. В данной статье речь пойдет о таком грибе, как мукор. Нам он больше известен под названием белая плесень. И каждый из нас наверняка не раз встречался с ней, возможно, даже на своей кухне. Гриб мукор обитает в верхних слоях почвы, а также на органических продуктах. Также он любит темные, влажные и теплые места. Если на кухне оставить небольшой кусочек хлеба, то через некоторое время на нем образуется пушистый белый налет, который со временем сереет — это и есть тот самый гриб мукор. Если внимательно присмотреться, то можно разглядеть его строение. Но хорошо рассмотреть части гриба мукора удастся только под микроскопом.

Размножение и питание

Размножается гриб мукор двумя способами: бесполым и половым. Первый способ более сложный, так как процесс созревания мицелия в спорангиях более длительный. Оболочка спорангий называется каллозой. Она очень устойчива к внешней агрессивной среде. Но под действием атмосферной влаги разрушается, выпуская на свет миллиарды спор. Последние имеют настолько маленькие размеры, что могут проникнуть куда угодно. Они всегда присутствуют в воздухе. Потому при благоприятных условиях плесень появляется всюду. При нити мицелия соединяются, образуя при этом зиготу. Так появляется новый гриб. Мукор — гриб-сапрофит, то есть он питается готовыми органическими веществами. Его еще называют грибом-мусорщиком, так как после него не остается органических отходов. Иногда такие грибы появляются на еще живом, но уже больном организме, после гибели которого останки будут полностью переработаны.

Опасность гриба мукор

Применение в медицине и пищевой промышленности

Определенные виды этого гриба, наоборот, очень полезны для человека. Так, из него готовят некоторые антибиотики (рамицин). Еще этот гриб используют в пищевой промышленности в качестве закваски (китайские дрожжи). С помощью него делают «темпе», «соевый сыр», производят картофельный спирт.

Как предотвратить заражение продуктов плесенью

Конечно же, необходимо следить за тем, чтобы продукты питания не подвергались заражению плесневыми грибами. Помимо того что это опасно, еще и экономически накладно. Для этого не оставляйте рядом с хорошими продуктами остатки еды. Следите за уровнем влажности в помещении. Уезжая надолго, не оставляйте продукты питания. И если на продукте, на первый взгляд еще пригодном для употребления, появилась плесень, кушать его уже нельзя.

Плесневые грибы давно и успешно сосуществуют с человеком. Одни разрастаются на продуктах питания или даже одежде, других специально выращивают в высокотехнологичных лабораториях. Причем нередко это одни и те же виды. Например, гриб мукор или другое его название белая плесень.

Внешний вид: описание и строение

Люди, далекие от микологии, иногда сталкиваются с колонией гриба мукора. У него несколько этапов развития: в самом начале представляет собой налет белесого пушка, именно поэтому в народе он больше известен под именем белой плесени. Хотя нередко бывает бежевым или сероватым.

В зависимости от среды, отдельные волоски достигают нескольких сантиметров в высоту. Со временем пятно темнеет. Это происходит, когда на кончике каждого волоска созревают черные головки со спорами – спорангии.

Строение плесневого гриба мукора очень простое. Мицелий погружен в субстрат и представляет собой сеть белых нитей (гиф) разветвляющихся и постепенно утончающихся к перефирии. Колония белой плесени — это растущие вверх от тела грибницы спорангиеносцы, на которых образуются головки спорангиев со спорами. Строение легко увидеть под микроскопом.

Питание

Для питания грибу мукору необходим кислород, высокая влажность, тепло и органика. Белая плесень с одинаковым успехом поселяется в навозе, продуктах питания и в верхних слоях почвы – там, где больше всего неразложившихся растительных остатков. По способу питания белую плесень относят к сапротрофам (извлекает питательные вещества из мертвого органического материала). Ему подойдут любые продукты, обладающие высокой калорийностью. Поэтому высокоуглеводный хлеб, картофель, фрукты, являются лакомыми объектами для разнообразия меню.

Размножение

В благоприятных условиях, когда нет недостатка в питании, тепло, влажно и есть постоянный доступ воздуха, мукор размножается бесполым способом: спорами.

Споры долго сохраняют жизнеспособность. Если воздушными массами их занесло в неблагоприятные условия – они попросту не будут развиваться, а выждут свой час. При появлении благоприятных условий споры прорастут, образуя новый мицелий гриба мукора.

Помимо этого для гриба мукора свойственно половое размножение, в том случае, если произошло истощение субстрата: гифы разных мицелиев сближаются вздутыми концами друг к другу (гаметангиями ) и образовывают зиготу, покрытую шиповатой оболочкой. По прошествии периода покоя оболочка зиготы лопается и из нее прорастает зародышевый мицелий на котором образуется зародышевый спорангий со спорами полового спороношения. И уже из этих спор начинает свое развитие мощный мицелий.

Использование

На самом деле грибов мукоров насчитывается порядка 60 видов. Некоторые из них выращивают для получения лекарственных препаратов – антибиотиков. Другие используются для приготовления продуктов питания. В этом случае плесневый гриб является закваской, например, для сыров тофу и темпе, кроме того, белая плесень участвует в процессе производства картофельного этанола.

В чем опасность

Безобидный, казалось бы, гриб может вызвать мукоромикоз – крайне редкое, но опасное поражение внутренних органов грибом мукором. Встречается у животных и человека. Споры, попадая в легкие или в порезы на коже, начинают развиваться: тепло, влажно и есть кислород. Это возможно только при снижении защитных функций организма. Правда, опасность представляют не более 5 видов из 60 известных.

Как вырастить

Стремительное развитие и нюансы размножения сделали белую плесень отличным объектом для проведения опытов: все стадии развития видны под микроскопом и представляют практический и научный интерес. Провести эксперимент по выращиванию гриба мукора очень легко. Почему? Потому что споры белой плесени есть практически везде – распространяются потоками воздуха.

Для опыта необходимо:

1. Создать среду для питания в отдельной емкости (можно использовать тарелку). Например, увлажнить кусочек хлеба или положить на мокрую основу: кусочек ткани, промокательной или фильтровальной бумаги.
2. Хлеб изолировать, накрыв сверху стеклянной банкой, стаканом или прозрачным пакетом.
3. Поместить конструкцию в тепло при температуре не ниже 20°С. Допустимые колебания – до 25°С.
4. В течение нескольких дней при условии, что хлеб постоянно находится во влажной среде, на нем появится белый пушок гриба мукора, который затем постепенно потемнеет.

Микроскопические живые организмы совсем рядом и охотно используют любую возможность для выживания. При этом вряд ли кто-то решится вырастить грибы мукоры в квартире для изготовления лекарств. Поэтому лучше заранее предотвратить саму возможность для их размножения и хранить продукты правильно.

Каждый не понаслышке знает, что если оставить продукты питания в теплой комнатной температуре на долгое время, то на еде появляется белая, с шероховатой поверхностью плесень, от которой исходит неприятный запах. Эта плесень называется гриб мукор. Его можно встретить не только на продуктах, но и на почве и разных остатках органического происхождения.

Мукор относится к грибам, которые могут оказывать негативное влияние на организм человека и животных и вызывать заболевания. Несмотря на это, его часто используют для производства антибиотиков, закваски и сброженных пищевых продуктов. Второе название микроорганизма – белая плесень.

Мукор относится к группе низших плесневых грибов из класса зигомицеты. Данный класс состоит из 60 видов. Отличительной чертой мукора является отсутствие перегородок в неклеточной структуре мицелия.

Как и остальные грибы, плесень имеет мицелий, который представлен большой недифференцированной клеткой, которая обладает большим количеством ядер в цитоплазме. Перегородки в клетке образуются в период размножения. Это способствует отделению спорангиев – репродуктивных органов.

Плесень неприхотлива, потому появиться и расти может в любом месте. Главное условие появления – питательные вещества, влажный и теплый воздух. Специалисты утверждают, что при наличии всех необходимых условий мукор может появиться даже в постройках между кирпичами или бетоном.

В случае неблагоприятных условий, спора покрывается защитной капсулой, обменные процессы замедляются и организм может существовать в таком виде до появления условий для возобновления жизнедеятельности. Мукор был обнаружен историками при раскопках гробниц египетских фараонов, что доказывает его широкую распространенность.

Внешний вид и фото

Внешний вид мукора полностью зависит от стадии развития. На начальном этапе он имеет вид белого пушка, благодаря чему он и получил название «белая плесень». Длина пушка зависит от условий внешней среды.

При активном росте количество спорангиев на концах пушка увеличивается, что придает организму сероватый оттенок. Зрелый организм имеет черный цвет. Как выглядит такой гриб, можно увидеть на фото.

Строение гриба мукора

Подробно изучить структуру белой плесени можно только под микроскопом. Основная часть гриба называется мицелием, который имеет вид клетки с разветвлениями и большим количеством ядер. Неотъемлемыми структурными частями являются гифы, которые отвечают за фиксацию тела в субстрате.

Гифы представлены тонкими ниточками, в основном, белого цвета, которые становятся более тонкими по отношению к периферии. То, что каждый видит невооруженным глазом, называется колонией, которая состоит из тонких волосков – спорангиеносцев. Эти структуры отвечают за размножение организма и растут из тела. Размер спорангиеносцев зависит от условий, они могут достигать до 2-3 см в высоту. В период размножения на конце каждой ворсинки появляется коробочка со спорами.

Размножение

Размножение мукора может происходить двумя путями – половым и неполовым:

Питание

По типу питания мукор относится к гетеротрофам, то есть, он не способен синтезировать органические вещества из неорганических. Для полноценного питания организму необходим высокий коэффициент влажности, тепло, наличие кислорода и готовые органические вещества.

В связи с этим плесень появляется в местах с большим количеством неразложившихся остатков растительного происхождения – пища, навоз. Также данный вид можно отнести к сапротрофным организмам, так как им характерно добывание органических веществ из мертвого материала. Такие высококалорийные продукты, как картофель, мучные изделия, фрукты привлекают белую плесень.

Полезные свойства и область применения

Плесень насчитывает около 60 видов, которые широко используются в разных сферах деятельности человека. В пищевой промышленности мукор используют для изготовления известных видов сыров, таких, как тофу и темпе. Эти сыры готовятся на основе закваски из гриба.

В Италии и Испании, которые славятся изобилием мясных продуктов, белую плесень используют для производства колбас. Так, в течение месяца колбасу хранят в темном прохладном помещении под слоем плесени, после чего продукты обрабатывают, а через несколько месяцев они поступают на прилавки магазинов.

Нередко гриб используют для получения картофельного спирта. Такое его использование базируется на активности ферментов гриба. Также его используют при производстве кисломолочных продуктов. Мукор считается ценным материалом в медицине, где из него получают антибиотик – рамицин.

В связи с широкой сферой использования мукора его выращивают в специальных лабораториях. Для этого в отдельной емкости создают благоприятную среду обитания, например, увлажняют кусок хлеба. После чего емкость изолируют и плотно накрывают. Емкость с субстратом ставят в теплое место с температурой не ниже 20 градусов, где спустя пару дней начинают расти колонии гриба.

Опасность мукора для живых организмов

Несмотря на полезные свойства гриба, он остается опасным не только для здоровья людей, но и для животных. Мукор является возбудителем мукоромикоза. Это заболевание, которое поражает сразу несколько систем организма человека и оказывает на него токсическое влияние.

Симптомами мукоромикоза являются:

• лихорадка;
• недомогание, головная боль;
• отечность и гиперемия кожи;
• дискомфорт и боль в мышцах лица;
• нарушения работы зрительного анализатора;
• мокрота с прожилками крови, что говорит о поражении легких;
• острые боли в пояснице, которые являются симптомом поражения почек.

Точная постановка диагноза осуществляется врачом после проведения ряда биохимических исследований. Чаще всего диагностируется риноцеребральный тип заболевания. Проникновение возбудителя в организм происходит при вдыхании его спор из зараженного воздуха, также заражение возможно при контакте поврежденного кожного покрова с пелесенью. Под угрозой заражения находятся люди с сахарным диабетом и нейтропенией, слабым иммунитетом.

Mucor — обзор | Темы ScienceDirect

Обсуждение

Alternaria, Aspergillus, Mucor, и Fusarium были наиболее распространенными родами, обнаруженными во всех статьях. Среди них одни роды вызывают большее беспокойство, чем другие, например роды Aspergillus и Mucor . Уже сообщалось о высокой распространенности обоих родов в помещениях и на производстве (Viegas et al ., 2017; Caetano et al ., 2019), что привело к опасностям для здоровья и росту случаев инфицирования Aspergillus и Mucor (Kontoyiannis et al ., 2005; Bitar et al ., 2009; Auberger et al ., 2012).

Aspergillus — очень распространенный род нитчатых грибов, который можно найти во многих различных средах, обычно они классифицируются как сапрофиты, но в некоторых случаях они также могут быть патогенными и причинять вред людям (Heitman, 2011; Seyedmousavi и др. ., 2015). Этот род классифицируется как условно-патогенный микроорганизм, который может вызывать широкий спектр респираторных заболеваний (Hope et al ., 2005). Конидии очень устойчивы в окружающей среде и могут оставаться жизнеспособными в течение нескольких месяцев. Кроме того, они хорошо подходят для рассеивания по воздуху (Pringle и др. , 2005). Кроме того, не следует пренебрегать присутствием Aspergillus , так как некоторые из его частей могут продуцировать токсичные соединения (Varga et al ., 2015; Viegas et al., ., 2018b), а также из-за растущей устойчивости к противогрибковым препаратам в клинике и окружающей среде (Fairlamb et al ., 2016; Nature Microbiology, 2017).

Порядок Mucorales, как известно, преобладает в помещениях и на производстве (Caetano et al ., 2017, 2018a; Viegas et al ., 2018a), и он включает различные виды сапрофитов, которые могут вызывать серьезные инфекции, как мукормикоз (Caetano et al ., 2018b) или другие серьезные проблемы со здоровьем (Lavergne et al ., 2017). Как уже упоминалось, количество случаев Mucorales растет, а количество резистентных к азолам штаммов растет. Их характеристики перекрестной резистентности показывают более критический сценарий в отношении лечения и лечения грибковых инфекций (Leathers and Sypherd, 1985; Cuenca-Estrella, 2014). Эта проблема, возможно, является результатом недостатка воздействия противогрибковых препаратов или других родственных химикатов, что может привести к пересмотру текущей терапии для этих случаев из-за потенциальных неудач лечения (Nature Microbiology, 2017).Более того, родов Mucor в Европе являются одними из наиболее идентифицированных грибов (Kwon-Chung, 2012; Lanternier et al ., 2012).

Уровень воздействия грибков может увеличиваться, если они присутствуют в определенных условиях, где уровни образующейся органической пыли высоки. Частицы действуют как переносчики микроорганизмов, вызывая распространение переносимых грибов (Caetano et al ., 2018a; Viegas et al ., 2020). Подобные сценарии, в которых воздействие органической пыли является высоким, могут быть обнаружены в сельскохозяйственных средах (Нарделл и Мачер и др. ., 1999; Jenerowicz et al ., 2012; Мбарече и др. ., 2019).

Среди методов выборки, использованных во всех наблюдаемых исследованиях, исключительное использование активных методов было наиболее распространенным подходом (10 из 18 исследований), а в 5 из 18 исследований использовались исключительно пассивные методы, в то время как комбинированное использование обоих методов были указаны только в 3 из 18 исследований. Использование пассивной и активной выборки имеет ряд преимуществ и недостатков. Пассивные методы считаются очень универсальным методом обнаружения микробного загрязнения в различных условиях, позволяющим лучше понять присутствующее загрязнение и улучшить характеристики окружающей среды в помещении (Viegas et al ., 2014, 2016а; Каэтано и др. , 2017). Активный отбор проб может предоставить информацию о нагрузке в воздухе в момент отбора проб, поскольку он собирает только часть воздуха на месте отбора проб (Napoli et al ., 2012). Таким образом, рекомендуется применение активных методов в сочетании с пассивными методами, так как таким образом можно получить более надежные данные за долгосрочные периоды (Viegas et al ., 2017; Leppänen et al ., 2018). Интеграция различных видов методов позволяет собирать более точные и полезные данные без необходимости полагаться на один метод для представления заданного сценария (Viegas et al ., 2017; Leppänen et al ., 2018).

Во всех проанализированных исследованиях был заявлен единый аналитический подход: морфологическая идентификация на основе методов, основанных на культуре. Этот метод считается хорошо известным и проверенным методом микробиологических исследований, позволяющим оценивать живые и культивируемые микроорганизмы. Он легко распознает и количественно определяет жизнеспособные клетки в образце и имеет высокую чувствительность при использовании в сочетании с подходящей средой (Фигдор и Гулабивала, 2011).Однако у него есть несколько недостатков, таких как риск внешнего загрязнения, его время и ресурсоемкость, он требует определенного уровня навыков для достижения оптимальных результатов и полагается на фенотипические биохимические характеристики, которые могут привести к предпочтению только некоторых жизнеспособных микроорганизмов. (Яннаш и Джонс, 1959; Аманн и др. ., 1995; Шмит и Лодж, 2005; Лю, 2011; Альшайли и Бани-Хассан, 2018; Виегас и др. ., 2019). Недооценка является основным ограничением этого метода, поскольку может резко недооценить количество и состав образцов (Фигдор и Гулабивала, 2011; Аль-Авади и др. ., 2013). Молекулярные инструменты могут преодолеть некоторые ограничения, поскольку обеспечивают более быстрое и точное описание микробных сообществ, присутствующих в каждом образце, по сравнению с методами, основанными на культивировании (аллохейли и Бани-Хассан, 2018). Однако, как и методы, основанные на культивировании, молекулярные инструменты также имеют некоторые ограничения, связанные с предпочтительным секвенированием некоторых видов, использованием неадекватных праймеров или получением отдельных полос (Polz and Cavanaugh, 1998; Sipos et al ). ., 2007). Таким образом, рекомендуется использовать оба метода параллельно. Действительно, сообщалось, что однократное использование методов на основе культивирования или молекулярных инструментов может привести к совершенно разным результатам (Al-Awadhi et al ., 2013), что добавляет важности применения обоих.

Руководство по борьбе с вредителями / Общегосударственная программа IPM UC (UC IPM)

Симптомы и признаки

Подобно грибку, вызывающему гниение плодов Rhizopus, Mucor spp. вторгаются в плод через малейшую рану.Грибок выделяет фермент, который быстро измельчает весь плод. В условиях повышенной влажности ягода покрывается слоем жесткого, жилистого мицелия и черного спороношения на концах длинных спороносных структур. Гнили плодов Mucor и Rhizopus очень похожи друг на друга, и их трудно различить в полевых условиях.

Комментарии к болезни

Поскольку грибок питается мертвыми и разлагающимися органическими веществами, санитарная обработка полей имеет важное значение.Заболевание особенно часто встречается в периоды теплой погоды в конце лета.

Менеджмент

Уберите с поля все спелые плоды и растительные остатки. Удалите и уничтожьте все спелые и почти спелые плоды с полей после дождя. Используйте пластиковую мульчу, чтобы фрукты не соприкасались с почвой. Соблюдайте правила гигиены во время сбора урожая, упаковки, транспортировки и хранения и всегда избегайте повреждения фруктов. В отличие от Rhizopus, некоторых видов Mucor , таких как M. mucedo и M. piriformis не ингибируются холодными температурами.

Культурный контроль

Санитарная обработка поля чрезвычайно важна. Всегда обращайтесь с фруктами осторожно. Убирайте с поля все спелые плоды во время сбора урожая и избегайте упаковки перезрелых плодов. При сборе плодов убедитесь, что весь плод полностью удален со стебля, не оставляя мясистого сосуда плода, поскольку он может служить местом для заражения грибком.

Органически приемлемые методы

Используйте санитарные меры, отбор сортов и быстрое послеуборочное охлаждение.

Решения о лечении

Обработка фунгицидами обычно не рекомендуется.

Руководство UC IPM по борьбе с вредителями: клубника
Публикация UC ANR 3468

S.T. Койке (заслуженный), TriCal Diagnostics, Hollister

G.Т. Браун, Патология растений, Калифорнийский университет в Дэвисе,

T.R. Гордон, Патология растений, Калифорнийский университет в Дэвисе

M.P. Болда, UC Cooperative Extension, округ Санта-Крус,

Благодарность за вклад в развитие болезней

W.D. Габлер (заслуженный), Патология растений, Калифорнийский университет в Дэвисе

W.M. Wintermantel, USDA ARS, Salinas (снижение уровня вируса клубники)

Текст обновлен: 18.07

Новый метод культивирования для производства микробного масла: гранулирование клеток и накопление липидов с помощью Mucor circinelloides | Биотехнология для производства биотоплива

Два новых вида Mucor из клинических образцов | Медицинская микология

Аннотация

Два новых вида в отряде Mucorales, Mucor velutinosus и Mucor ellipsoideus , выделенные из клинических образцов человека в США, описаны и проиллюстрированы.Первый вид похож на Mucor ramosissimus , от которого его можно отличить по способности расти при 37 ° C и продуцировать спорангиоспоры веррукозы. Mucor ellipsoideus также способен расти и спорулировать при 37 ° C, как и M. indicus , ближайший филогенетический вид в этом исследовании, однако первый имеет узкие эллипсоидальные спорангиоспоры в отличие от спорангиоспор от субглобальных до эллипсоидальных из M. Индикус . Анализ последовательностей ITS и D1 – D2 участков генов рРНК подтвердил новизну этих видов. in vitro противогрибковая чувствительность нового вида показала, что амфотерицин B был активен против всех изолятов, а позаконазол и итраконазол показали низкую активность.

Введение

Тип Zygomycota — это искусственное скопление грибов с неопределенным таксономическим положением. Большинство родов этого типа в настоящее время включены в подтип Mucoromycotina [1], причем Mucor является родом с наибольшим количеством видов.Молекулярные исследования показали, что Mucor — это полифилетический род [2]. Члены Mucor характеризуются быстрорастущими колониями, простыми или разветвленными спорангиофорами без базальных ризоидов, неапофизатными спорангиями и зигоспорами, имеющими более или менее равные противоположные суспензоры без придатков [3–5]. Несколько видов Mucor имеют важные биотехнологические применения и используются при разработке различных видов азиатских продуктов питания [6–8]. Mucor является, после Rhizopus , наиболее клинически значимым родом Mucorales [9,10].Виды, наиболее часто вызывающие инфицирование человека, — это Mucor circinelloides , Mucor indicus , Mucor racemosus и Mucor ramosissimus [3,9].

В недавнем филогенетическом исследовании видов мукоралеев из США, куда была включена широкая панель клинических изолятов, некоторые изоляты Mucor не могли быть должным образом идентифицированы на уровне видов. Эти изоляты показали важные отличительные морфологические признаки и были разделены на две хорошо обоснованные филогенетические клады ( Mucor sp.1 и Mucor sp. 2) [9]. В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что эти две клады представляют собой два новых вида Mucor , которые описаны и проиллюстрированы здесь.

Материалы и методы

Изоляты грибов

Всего в настоящее исследование включены семь клинических изолятов Mucor , которые ранее не удалось идентифицировать [9]. Три из этих изолятов были разработаны как Mucor sp.1, четвертый изолят как Mucor sp. 2 и трое других не были названы. Типовые или эталонные штаммы наиболее клинически значимых видов этого рода и некоторые штаммы видов, морфологически родственные некоторым из этих изолятов, такие как Mucor fragilis и Mucor fuscus , также были включены в это исследование (Таблица 1). Все изоляты пересевали на картофельный агар с декстрозой (PDA, Pronadisa, Мадрид, Испания) при комнатной температуре (25 ° C) в течение 2–5 дней.

, включенные в исследование, и их происхождение.

, включенные в исследование, и их происхождение.

Экстракция, амплификация и секвенирование ДНК

экстрагировали и очищали непосредственно из грибковых колоний в соответствии с протоколом набора Fast DNA (Bio101, Vista, Calif., США) с незначительной модификацией, состоящей из стадии гомогенизации, повторенной трижды с помощью прибора FastPrep FP120 (Thermo Savant, Холбрук, Нью-Йорк, США). ДНК количественно определяли с помощью GeneQuant pro (Amersham Pharmacia Biotech, Кембридж, Англия). Внутренний транскрибируемый спейсер (ITS) гена ядерной рРНК амплифицировали с парой праймеров ITS5 и ITS4 [11], а домены D1-D2 гена 28S рРНК амплифицировали с парой праймеров NL1-NL4 [12].

Смесь для ПЦР (25 мкл) включала 10 мМ трис-HCl (pH 8.3), 50 мМ KCl и 2,5 мМ MgCl ₂ (10X буфер Перкина-Элмера II плюс MgCl ₂ раствор Roche Molecular Systems, Бранчбург, Нью-Джерси, США), по 100 мкМ каждого дНТФ (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) , 1 мкМ каждого праймера и 1,5 ед. ДНК-полимеразы Ampli Taq (Roche). Программа амплификации включала начальную денатурацию при 94 ° C в течение 5 минут, затем 35 циклов денатурации при 95 ° C в течение 30 с, отжиг в течение 1 минуты при 55 ° C и удлинение в течение 1 минуты при 72 ° C. После ПЦР продукты очищали с помощью набора для очистки ДНК и гель-ленты Illustra GFX ™ PCR (General Electric Healthcare, Бакингемшир, Великобритания) и хранили при -20 ° C до их использования в секвенировании.Продукты ПЦР секвенировали с использованием тех же праймеров, которые использовались для амплификации, и в соответствии с протоколом Taq DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Gouda, Нидерланды). Реакции проводили на секвенаторе ДНК 310 (Applied Biosystems). Согласованные последовательности получали с использованием программы Autoassembler (PerkinElmer-Applied Biosystems) и программы Seqman (Lasergene, Madison, WI). Некоторые последовательности, соответствующие нескольким видам Mucor , которые могли быть родственны нашим клиническим изолятам, или другим родам Mucorales, которые были филогенетически связаны с Mucor в предыдущих исследованиях [2], были извлечены из GenBank и включены в филогенетическое исследование.

Филогенетические анализы

Clustal X 1.8 использовали для выравнивания последовательностей с последующей ручной корректировкой с помощью текстового редактора. Для индивидуального анализа генов использовали программу MEGA 4.0. Алгоритм максимального совокупного правдоподобия был использован для определения эволюционных расстояний между последовательностями. Деревья были созданы с использованием метода объединения соседей (NJ). Пробелы обрабатывались опцией попарного удаления MEGA. Поддержка внутренних ветвей оценивалась путем поиска 1000 начальных наборов данных.

Фенотипические исследования

Изолятов культивировали на КПК, агаре Чапека (CZA; Difco, Becton Dickinson, Франция) и агаре с солодовым экстрактом (MEA; 10 г солодового экстракта, 20 г агара и 1000 мл дистиллированной воды), инкубировали при 25 ° C. в темноте и осматривали ежедневно. Цветовые обозначения в скобках взяты из работы Корнерупа и Ваншера [13]. Микроскопические характеристики были определены в креплениях на молочной кислоте. Микрофотографии были сделаны с использованием светового микроскопа Zeiss Axio Imager M1.Микрофотографии, полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа (СЭМ), были получены с помощью сканирующего электронного микроскопа Jeol JSM-6400 с использованием методик, описанных ранее Фигерасом и Гуарро [14]. Все изоляты были охарактеризованы морфологически в соответствии с традиционными критериями [3–5,15–17]. Скорость роста изолятов при различных температурах (4, 15, 25, 30, 37, 42, 45 и 50 ° C) определяли на чашках Петри PDA диаметром 90 мм, которые были засеяны в центре, и диаметры колоний (в мм) измеряли ежедневно в течение 10 дней.

Чувствительность к противогрибковым препаратам

Активность in vitro амфотерицина B (USP, Роквилл, Мэриленд, США), позаконазола (Schering-Pllow Europe, Брюссель, Бельгия) и итраконазола (Janssen Pharmaceutica, Beerse, Бельгия) в отношении семи клинических изолятов оценивалась после эталонный метод микроразбавления (M38-A2) [18].

Номера доступа нуклеотидной последовательности

Последовательности ITS-области и D1-D2-доменов гена 28S рРНК изолятов, перечисленных в таблице 1, депонированы в GenBank.Номера доступа показаны в той же таблице.

Результаты

Филогенетические анализы

С использованными праймерами длины ампликонов ITS-областей и D1 – D2-доменов гена 28S рРНК составляли 530–572 п.н. и 576–658 п.н. соответственно. Филогенетическое древо, выведенное из анализа нуклеотидных последовательностей ITS с помощью NJ (рис. 1), показало, что Mucor sp. 1 и Mucor sp. 2 были расположены в двух хорошо опертых кладах.Три изолята Mucor sp. 1 составляла ветвь с высокой степенью поддержки (100% поддержка бутстрапа (bs)) в самой большой кладе (96% bs), куда также были помещены Mucor circinelloides f. circinelloides , M. circinelloides f. lusitanicus , M. fragilis , M. plumbeus , M. racemosus и M. ramosissimus , а также клинические изоляты UTHSC 03-1823, UTHSC 03-1044 и 04-2492.Изоляты UTHSC 03-1823 и UTHSC 03-1044 были генетически очень близки к референсным штаммам M. circinelloides f. lusitanicus и последовательности EU484227, депонированной в GenBank. Изолят UTHSC 04-2492 был вложен в эталонный штамм (CBS 236.35) M. fragilis , но две последовательности, извлеченные из GenBank (EU862184 и EU484238), депонированные как M. fragilis , были четко отделены от них. Изолят Mucor sp. 2 гнездился в очень далекой кладе (94% bs) вместе с M.amphibiorum и M. indicus , но четко отделены от этих видов. По этому маркеру, филогенетически более далекие виды Mucor — это Mucor flavus и M. hiemalis , последний образует кладу с типом Rhizomucor variabilis var. variabilis . Виды нескольких родов, которые другие авторы [2] ранее сообщали как тесно связанные с Mucor , такие как Actinomucor elegans и Parasitella parasitica , были более разделены.

Рис. 1

Дерево соединения соседей основано на максимальном суммарном правдоподобии скорректированных нуклеотидных расстояний между участками рибосомного внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS) и последовательностями гена 5.8S рРНК штаммов Mucor и родственных таксонов. Значения поддержки Bootstrap выше 70% указаны на узлах. Полоса указывает на генетическую дистанцию. Последовательности Parasitella и Actinomucor использовали для укоренения филограммы.

Фиг.1

Дерево соединения соседей основано на максимальном суммарном правдоподобии скорректированных нуклеотидных расстояний между рибосомными внутренними транскрибируемыми спейсерами (ITS) и последовательностями гена 5.8S рРНК штаммов Mucor и родственных таксонов. Значения поддержки Bootstrap выше 70% указаны на узлах. Полоса указывает на генетическую дистанцию. Последовательности Parasitella и Actinomucor использовали для укоренения филограммы.

Филогенетическое дерево, полученное на основе анализа доменов D1 – D2 гена 28S рРНК (рис.2) имел топологию, аналогичную топологии ITS-дерева. Семь клинических изолятов, исследованных в этом исследовании, показали генетические отношения, аналогичные показанным на рис. 1.

Рис. 2

Дерево объединения соседей, основанное на максимальном суммарном правдоподобии скорректированных нуклеотидных расстояний между последовательностями гена 28S рРНК доменов D1-D2 штаммов Mucor и родственных таксонов. Значения поддержки Bootstrap выше 70% указаны на узлах. Полоса указывает на генетическую дистанцию.Последовательность Backusella использовали в качестве внешней группы для корневой филограммы.

Рис. 2

Дерево объединения соседей, основанное на максимальном суммарном правдоподобии скорректированных нуклеотидных расстояний между последовательностями гена 28S рРНК доменов D1-D2 штаммов Mucor и родственных таксонов. Значения поддержки Bootstrap выше 70% указаны на узлах. Полоса указывает на генетическую дистанцию. Последовательность Backusella использовали в качестве внешней группы для корневой филограммы.

Фенотипические анализы

Минимальная, оптимальная и максимальная температуры роста изолятов Mucor sp.1 составляли 7 ° C, 25 ° C и 37 ° C соответственно. Эти изоляты хорошо росли на всех протестированных средах, давая серовато-бархатные колонии. Микроскопически их спорангиофоры были в основном разветвлены симподиально, а спорангиоспоры были от шаровидных до субглобковых, толстостенных и бородавчатых. Изолят Mucor sp. 2 также имели минимальную, оптимальную и максимальную температуры роста 7 ° C, 25 ° C и 37 ° C, соответственно, но образовывали колонии от белого до бледно-желтого цвета во всех тестируемых средах. Микроскопически спорангиофоры были простыми или симподиально разветвленными, а спорангиоспоры были узкоэллипсоидными, с толстыми и гладкими стенками.Минимальная, оптимальная и максимальная температуры роста клинических изолятов UTHSC 03-1823, UTHSC 03-1044 и UTHSC 04-2492 из Mucor sp. составляли 15 ° C, 25 ° C и 37 ° C соответственно. Микроскопические характеристики этих трех изолятов были схожими, то есть их спорангиофоры были симподиально разветвленными, а спорангиоспоры были очень разнообразными по форме (яйцевидными, эллипсоидальными, субсферическими или неправильными), а также тонкими и гладкими стенками.

Чувствительность к противогрибковым препаратам

Минимальные ингибирующие концентрации протестированных противогрибковых препаратов показаны в таблице 2.Амфотерицин B был активен против всех изолятов. Позаконазол и итраконазол показали низкую активность.

теста на чувствительность к противогрибковым препаратам in vitro .

Результаты тестирования противогрибковой чувствительности in vitro .

На основании молекулярных и фенотипических результатов мы предлагаем Mucor sp. 1 и Mucor sp. 2 в качестве следующего нового вида.

Mucor velutinosus E. Álvarez, Stchigel, Cano, D. A. Sutton & Guarro, sp. ноя (Рис. 3A – D; Рис. 4; Рис. 5)

Рис.3

Mucor velutinosus UTHSC 02-1981. (A) Схема ветвления спорангиеносов. (B) Колумеллы. (C) Спорангиоспоры. (D) Хламидоспоры. Штанги: A – B = 50 мкм; C – D = 5 мкм.

Рис.3

Mucor velutinosus UTHSC 02-1981. (A) Схема ветвления спорангиеносов. (B) Колумеллы. (C) Спорангиоспоры. (D) Хламидоспоры. Штанги: A – B = 50 мкм; C – D = 5 мкм.

Рис.4

Mucor velutinosus UTHSC 02-1981.(A) Спорангий и споры спорангиев (СЭМ). Mucor ellipsoideus UTHSC 02-2090. (B) Спорангии и спорангиоспоры (СЭМ). Масштаб обозначается полосами.

Рис.4

Mucor velutinosus UTHSC 02-1981. (A) Спорангий и споры спорангиев (СЭМ). Mucor ellipsoideus UTHSC 02-2090. (B) Спорангии и спорангиоспоры (СЭМ). Масштаб обозначается полосами.

Рис. 5

Морфология колоний на КПК. (A) Mucor velutinosus UTHSC 02-1981.(B) Mucor racemosus CBS 260.68.

Рис. 5

Морфология колоний на КПК. (A) Mucor velutinosus UTHSC 02-1981. (B) Mucor racemosus CBS 260.68.

= Mucor sp. 1 sensu Álvarez et al . J Clin Microbiol 2009; 47 : 1650–1656.

Ad 25 ° C в agaro cum decocto malturorum (MEA) coloniae velutinosae, высота 0,5–2 мм, надколенники Петри в кварто, primum albae, cito cinerea (M.1E1), у adversum albidum. Sporangiophora erecta, simplicia et simpodialiter ramosa, длина 200–1000 мкм, ширина 4–15 мкм; rami sporangiophoris 10–200 мкм longi, 5–12 мкм lati, eseptati vel cum septum 1-pluribus, hyalini vel brunnei, cum sporangio terminatibus nonapophysati. Sporangia globosa vel subglobosa, диаметр 15–60 мкм, griseola vel griseola-brunnea, parietibus subpersistentibus, lente tabidis vel disruptis. Columellae globosae vel turbinatae, диаметр 10–50 мкм, hyalinae vel brunneae; collaria independenta.Sporangiosporae globosae, subglobosae, ovoideae vel irregulares, 4–15 мкм в диаметре, griseo-brunneae, eminenter verrucosae. Zygosporae ignotae.

Колонии бархатистые, высотой 0,5–2 мм, заполняющие чашку Петри после 4 дней инкубации при 25 ° C на MEA, сначала белые, вскоре становятся серыми (M. 1E1), обратными беловатыми. Ризоиды обильные. Спорангиеносцы прямостоячие, преимущественно симподиально разветвленные (5–15 раз), длина 200–1000 мкм, ширина 4–15 мкм; ветви 10–200 мкм длиной, 5–12 мкм шириной, без перегородок или с одной перегородкой, бесцветные или коричневатые, простые, заканчивающиеся неапофизатным спорангием.Спорангии шаровидные или почти шаровидные, диаметром 15–60 мкм, от серого до серовато-коричневого цвета, стенка медленно растворяется, иногда сломанная. Колумеллы от шаровидных до конических, диаметром 10–50 мкм, от прозрачных до коричневых; воротник очевиден. Спорангиоспоры шаровидные, почти шаровидные, яйцевидные или неправильной формы, толстостенные, серовато-коричневые, диаметром 4–15 мкм, крупнозернистые. Концевые или интеркалярные хламидоспоры, одиночные или короткоцепочечные (до 4), от гиалиновых до субгиалиновых, шаровидные, эллипсоидальные, бочкообразные, цилиндрические или неправильные, 9–25 × 6–15 мкм, очень толстостенные, образуются на гифах , спорангиеносцы.Зигоспоры отсутствуют.

Колонии на КПК аналогичны колониям на МЭА. На CZA колонии были гиалиновыми, а наоборот — однотонными, с редким воздушным мицелием высотой до 2 мм. Оптимальная температура роста составляла 25 ° C, минимальная — 7 ° C. При 37 ° C рост происходил, но споруляции не наблюдалось. Гриб не мог расти при 42 ° C.

Голотип . CBS H-20399, из участка центральной венозной линии, Коннектикут, США. Живые культуры ex-type FMR 10020, UTHSC 02-1981 и CBS 126272

Этимология .Эпитет velutinosus относится к бархатистой текстуре колоний.

Mucor ellipsoideus E. Álvarez, Cano, Stchigel, D. A. Sutton & Guarro, sp. ноя (Рис. 4B; Рис. 6A – D)

= Mucor sp. 2 sensu Álvarez et al . J Clin Microbiol 2009; 47 : 1650–1656.

Рис.6

Mucor ellipsoideus UTHSC 02-2090. (А) Хламидоспоры. (B) Колумеллы.(C) Спорангий. (D) Спорангиоспоры. Все стержни 10 мкм.

Рис.6

Mucor ellipsoideus UTHSC 02-2090. (А) Хламидоспоры. (B) Колумеллы. (C) Спорангий. (D) Спорангиоспоры. Все стержни 10 мкм.

Ad 25 ° C в agaro cum decocto malturorum (MEA) coloniae velutinosae, высотой 2–5 мм, надколенниками Петри в die nono, primum albae, cito flavidae (M. 4A3), в adversum flavidum (M. 4A4). Sporangiophora erecta, simplicia et simpodialiter ramosis ad basim et bifurcata vel trifurcata ad apicem, длина 1000–3000 мкм, ширина 4–10 мкм; rami sporangiophoris 20–1000 мкм longi, 3–6 мкм lati, eseptati vel cum septum 1-pluribus, hyalini, cum sporangio terminatibus tenuiapophysati.Sporangia subglobosa, (11–) 16–48 × (12–) 18–50 мкм, pallide aurantiobrunnea, cum parietibus spinulosus, lente tabidis vel disruptis. Columellae globosae vel subglobosae, диаметр 10–45 мкм, hyalinae; коллария нечеткая. Sporangiosporae 4–8 × 2–3 мкм, hyalinae, levitunicatae. Zygosporae ignotae.

Колонии бархатистые, высотой 2–5 мм, заполняющие чашку Петри после 9 дней инкубации при 25 ° C на MEA, сначала белые, вскоре становятся бледно-желтыми (M. 4A3), обратными бледно-желтыми (M. 4A4). Ризоиды очень многочисленные, образуются из различных частей гиф, простые или разветвленные, без перегородок, прямые или изогнутые, быстро исчезают.Спорангиеносцы прямостоячие, простые и симподиально разветвленные (5–10 раз) в основании и от двух до трехстворчатых на вершине, отходящие непосредственно от поверхностных и надземных гиф, длиной 1000–3000 мкм, шириной 4–10 мкм; ветви 20–1000 мкм длиной, 3–6 мкм шириной, без перегородок или с одной перегородкой, бесцветные, простые. Спорангии субглобные, (11–) 16–48 × (12-) 18–; 50 мкм, бледно-желтовато-коричневые, со стенкой шиповидной, медленно растворяющейся, иногда сломанной. Колумеллы от округлых до конических, диаметром 10–45 мкм, гиалиновые, устойчивые, разрушающиеся у основания; воротник не виден.Спорангиоспоры узкоэллипсоидные (иногда уплощенные с одной стороны), 4–8 × 2–3 мкм, гиалиновые, гладкостенные. Обильные хламидоспоры, оидиеподобные, толстостенные, терминальные или интеркалярные, одиночные или в виде длинных цепочек, от гиалиновых до субгиалиновых, шаровидные, эллипсоидальные, бочкообразные, цилиндрические или неправильные, 4–30 × 7–20 мкм, очень толстостенные , образующиеся на гифах, спорангиеносах, спорангиях и ризоидах. Зигоспоры отсутствуют.

Характеристики колоний на КПК были аналогичны тем, которые можно было увидеть на MEA. На CZA колонии были гиалиновыми с однотонной обратной стороной.Оптимальная температура роста составляла 25 ° C, минимальная — 7 ° C. При 37 ° C наблюдался рост и спороношение. Гриб не рос при 42 ° C.

Голотип . CBS H-20398 из жидкости для перитонеального диализа пациента-человека с хронической почечной недостаточностью, Флорида, США. Живые культуры ex-type FMR 10021, UTHSC 02-2090 и CBS 126271.

Этимология . Эпитет ellipsoideus указывает на форму спорангиоспор.

Обсуждение

Вариабельность нуклеотидных последовательностей ITS-области сообщается несколькими авторами как полезный признак для различения таксонов, включенных в отряд Mucorales [19,20].Рабочая группа ISHAM по молекулярной идентификации грибов также предложила использовать ITS-последовательности в качестве надежного метода для этой цели [21]. В предыдущем исследовании, используя этот маркер, мы смогли идентифицировать многочисленные виды Mucorales из клинических образцов в США [9]. Однако в этом исследовании не удалось идентифицировать несколько изолятов Mucor . Здесь они могли быть однозначно идентифицированы после морфологического и генетического сравнения этих изолятов с эталонными штаммами родственных видов Mucor .Изоляты UTHSC 04-1961, UTHSC 02-1981 и UTHSC 06-1667 описаны здесь как новый вид M. velutinosus . Этот вид показал тесную молекулярную связь с M. circinelloides и M. ramosissimus , но его можно отличить от них по образованию более крупных и украшенных спорангиоспор . Mucor velutinosus также имеет некоторые сходства с другими видами Mucor с симподиально разветвленными спорангиеносами и шаровидными спорангиоспорами, такими как M.amphibiorum , M. fuscus и M. plumbeus. Однако Mucor amphibiorum не растет при 37 ° C, образует более высокие (до 25 мм) колонии, более широкие (до 20 мкм) спорангиофоры и спорангиоспоры с гладкими стенками и меньшего размера (3,4–5,4 мкм в диаметре); Mucor fuscus является наиболее похожим видом на M. velutinosus , поскольку оба образуют орнаментированные спорангиоспоры, но это украшение состоит из мельчайших выступов на стенках M. fuscus , которые имеют крупную веррукозу на M.velutinosus . Кроме того, M. fuscus отличается от M. velutinosus отсутствием роста при 37 ° C, образованием грушевидной формы и более крупных (до 80 × 52 мкм) колумелл и спорангиев (до 140 мкм в диаметре) и незначительной спорангиоспоры меньшего размера (до 11 мкм в диаметре). Mucor plumbeus , также продуцирует шаровидные и веррукозные спорангиоспоры, но его спорангиоспоры менее крупно орнаментированы, чем у M. velutinosus , он дает колумеллы с одним или несколькими выступами и не может расти при 37 ° C.

Изолят UTHSC 02-2090 описан здесь как новый вид Mucor ellipsoideus . Этот вид генетически родственен M. amphibiorum и M. indicus . Однако M. ellipsoideus легко отличить от них, поскольку M. amphibiorum не растет при 37 ° C и дает более мелкие и сферические спорангиоспоры, а M. indicus растет при 42 ° C и дает спорангии меньшего размера. и более мелкие эллипсоидальные спорангиоспоры [3,17].

Три других клинических изолята, UTHSC 03-1823, UTHSC 03-1044 и UTHSC 04-2492, были идентифицированы как M. lusitanicus . Шиппер [17] считал M. circinelloides f. lusitanicus в отличие от M. circinelloides f. circinelloides в зависимости от формы и размера спорангиоспор. Мы исследовали эти грибы морфологически и согласны с Шиппером в том, что они фенотипически различны. Эти различия были подтверждены в нашем филогенетическом исследовании; однако мы делаем вывод, как сообщалось ранее, что эти два гриба следует рассматривать как два разных вида, т.е.е., M. lusitanicus и M. circinelloides [22,23], вместо двух formae того же вида. Следовательно, два клинических изолята были идентифицированы как M. lusitanicus .

Изолят UTHSC 04-2492, сгруппированный в наших филогенетических анализах, со штаммом M. fragilis (CBS 236.35) и двумя последовательностями, депонированными в GenBank как M. fragilis (EU862184 и EU484238). К сожалению, типа этого вида не существует и штамм CBS 236.35, идентифицированный Zycha в 1935 г. [24], является единственным доступным эталонным штаммом этого вида. Мы согласны с Шиппером [15], что этот штамм отличается от исходного описания вида [25] по важным признакам, например, он не производит зигоспор, а его спорангиоспоры крупнее (4–10 × 3–7 мкм против 4,2 мкм). × 2,1 мкм в исходном описании M. fragilis ), и они не имеют голубоватого оттенка. Напротив, этот изолят морфологически похож на штаммы M. lusitanicus , включенные в наше исследование, показывая процент сходства с типовым штаммом этого вида (CBS 108.17) 98% (область ITS) и 99,6% (домены D1-D2).

Таксономия рода Rhizomucor , морфологически близкого к Mucor , остается нерешенной. Ранее мы продемонстрировали, что Rhizomucor variabilis var. regularior и R. variabilis var. variabilis были двумя разными видами, генетически связанными с Mucor spp. и четко отделен от Rhizomucor pusillus , типового вида этого рода [9]. Rhizomucor variabilis var. regularior морфологически и генетически неотличим от M. circinelloides [9] и R. variabilis var. variabilis, в настоящем исследовании, генетически родственны Mucor hiemalis и M. mucedo . Производство ризоидов и термофильные свойства традиционно считались основными характеристиками, которые отличают Rhizomucor от Mucor ; однако эти признаки следует рассматривать как гомоплазивные, поскольку несколько видов Mucor , например M.circinelloides и M. velutinosus также продуцируют ризоиды, а также некоторые виды Mucor , такие как M. indicus, , являются термотолерантными. Подробное исследование важнейших морфологических характеристик R. variabilis var. variabilis и R. variabilis var. regularior показал, что недостаточно признаков, чтобы отделить их от Mucor , и поэтому мы предлагаем следующие таксономические изменения:

Mucor circinelloides Tieghem — Annls Sci.физ. 1: 94. 1875

Mucor ambiguus Vuill. — Бык. Soc. Sci. Нэнси 8: 92. 1886

Mucor alternans Tieghem in Gayon & Dubourg — Annls Inst. Pasteur, Paris 1: 532. 1887

Mucor javanicus Wehmer — Zentbl. Бакт. ParasitKde, Abt. 2, 6: 619. 1900

Mucor dubius Wehmer — Zentbl. Бакт. ParasitKde, Abt. 2, 7: 318. 1901 ( nomen provisorium ).

Mucor prainii Chodat & Nechitch в Нечиче — Sur les ferments de deux levains de I’Inde.Le Mucor Prainii et le Dematium chodati, Женева, стр. 38. 1904

Mucor griseo-roseus Linnemann — Beitrag zu einer Flora der Mucorineae Marburgs, p. 189. 1936

Mucor ramificus B. S. Mehrotra & Nand — Sydowia 20: 69. 1966

Mucor mandshuricus Saito — Rep. Cent. Лаборатория. С. Мандш. Railw. Ко. 1: 16. 1914 = Mucor circinelloides Tieghem var. mandshuricus (Saito) Milko — Атлас мукоральных грибов, с.67. 1971

Circinomucor circinelloides (Tiegh.) Arx — Sydowia 35 : 18. 1982

Rhizomucor variabilis var . regularior R. Y. Zheng & G.Q. Chen — Mycosystema 6 : 2. 1993

M ucor lusitanicus Bruderl. — Бык. Soc. Бот. Genève 8 : 276. 1916

Mucor griseo-lilacinus Povah — Бык. Бот Торри. Club 44 : 301. 1917.

Mucor jauchae Lendner — Bull.Soc. бот. Женева 10 : 374. 1918

Mucor zeicolus Graff — Список культур CBS, стр. 71. 1939 г. ( nomen nudum )

Mucor racemosus Fresen var. lusitanicus (Bruderlein) Наумов — Clés des Mucorinées (Mucorales), стр. 47. 1939

Mucor circinelloides Tiegh. f. lusitanicus (Bruderl.) Schipper — Stud. Mycol. 12 : 9. 1976

Mucor irregularis Stchigel, Cano, Guarro & Álvarez, nom.ноя

= Rhizomucor variabilis var. variabilis R. Y. Zheng & G. Q. Chen, Mycosystema 4 : 47. 1991

Non M. variabilis A.K. Sarbhoy, Trans. Br. mycol. Soc. 48 : 559. 1965.

Ключ для различения наиболее подходящих клинических видов Mucor

Ключ для различения наиболее релевантных клинических видов Mucor

В филогении рДНК D1 – D2 видов Chaetocladium brefeldii , Kirkomyces 9000 и paradense cordense были связаны с некоторыми паразитными паразитами и паразитами 0006 из Mucor .О такой связи также сообщили О’Доннелл и др. . [2] на основе филогенетического анализа генов 18S рДНК и факторов элонгации трансляции. На основе явной полифилии Mucor необходимы дальнейшие молекулярно-филогенетические анализы для определения границ природных таксонов и родственных связей. Род Parasitella был создан Bainier [25] (1903) для размещения Mucor parasiticus , который морфологически родственен другим видам рода Mucor , но отличается от них способностью паразитировать на других Mucorales и по наличию пальцевидных выступов на подвесках зигоспор [26].Позже другие авторы [5,24,27] также дифференцировали Parasitella от Mucor путем образования узловатых вегетативных структур, полученных в результате слияния гиф паразита и хозяина. Однако этих морфологических и экологических различий недостаточно, чтобы рассматривать Parasitella и Mucor как отдельные роды. Размещение Chaetocladium и Kirkomyces , смешанных с различными видами Mucor , на филогенетических деревьях, о которых сообщает O’Donnell et al .[2] продемонстрировали полифилию Mucor.

Результаты по чувствительности к противогрибковым препаратам показали, что амфотерицин B является наиболее активным противогрибковым средством против нового вида (Таблица 2), факт, сообщенный многими другими авторами для других видов Mucor , имеющих клиническое значение [28]. Позаконазол и итраконазол показали ограниченную активность.

Предоставляется дихотомический ключ для различения наиболее важных клинических видов Mucor ( M. ellipsoideus не включен, поскольку он был выделен только один раз из жидкости для перитонеального диализа, и его истинная клиническая роль проблематична).

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами CGL 2007-65669 / BOS и CGL 2009-08698 / BOS, предоставленными Министерством экономики и технологий Испании. Благодарим Каталину Нуньес за техническую помощь.

Заявление об интересах: Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов. Только авторы несут ответственность за содержание и написание статьи.

Список литературы